收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

无指盘臭蛙皮表金黄杆菌分离鉴定及其胞外蛋白酶研究

董靖  
【摘要】: 从无指盘臭蛙表皮中分离到一株具有很强胞外蛋白水解酶活性的菌株CW-E2。通过形态学、化学成分、生理生化和16S rDNA序列分析确定CW-E2的分类地位;并深入研究该菌株蛋白水解酶活力及其相关特性,最终确定该酶为黄质金黄杆菌来源的金属蛋白酶。 CW-E 2革兰氏染色反应呈阴性,菌体短杆状,无鞭毛,透射电镜观察,菌体宽0.5-0.7μm,长1.1-1.3μm,菌落呈圆形,边缘光滑,直径1-1.5mm,并且相互粘连,表面光滑并突起,产生黄色素,有金黄色光泽。菌体无运动性,细胞长有周身菌毛,不产生孢子,好氧,化能异养型。 用微生物biolog GN2和API 20NE系统测定生理生化结果为:该菌株能很好的利用D-果糖、D-葡萄糖、D-半乳糖等单糖为唯一碳源生长,并能够利用D-果糖、D-麦芽糖、D-海藻糖等发酵产酸,具有过氧化氢酶、β-半乳糖苷酶,苯丙氨酸脱羧酶等活性;但没有鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶,DNA酶和脲酶等活性;不能还原硝酸盐和亚硝酸盐;能够强烈的液化分解白明胶;有酪氨酸水解酶活性,能够水解吐温80。呼吸链主要醌种类是六碳烷基侧链的甲基奈醌(MK-6)。该菌株无Na~+、维生素等其它特殊营养要求,能生长于0-6%NaCl盐浓度范围内,其中1%浓度的NaCl是最佳的盐离子生长条件。在LB平板上能产生一种不能扩散的黄色素flexirubin。菌株温度范围是5-42℃,最适生长温度是30-35℃;能够在麦康凯培养基上生长;不能水解纤维素;对于羧苄青霉素、四环素、强力霉素、庆大霉素、青霉素G、卡那霉素、万古霉素、红霉素、利福平、新霉素、链霉素和氯霉素敏感;但对于氨苄青霉素、林肯霉素和多粘菌素具有较高的耐受性。测定CW-E2的G+C mol%含量为37.2%。 CW-E2的主要脂肪酸是i-C15:0;i-C17:1ω9c;和i-C17:03-OH。16S rDNA序列同源性分析表明,CW-E2与C.gleum ATCC 35910T和C.indologenes ATCC 29897T菌株序列同源性均为93.9%,与菌株C.joostei LMG 182/2T的序列同源性为94.9%。 通过形态学、生理生化、脂肪酸和16S rDNA序列同源性多相分析,最终确定CW-E2的分类地位为:纤维粘茵-黄杆菌-类杆菌(CFB)门,黄杆菌纲(Flavobacteria),黄杆菌目(Flavobacteria),黄杆菌科(Flavobacteriaceae),金黄杆菌属(Chryseobacterium)的一个新种。并将其命名为黄质金黄杆菌(Chryseobacterium.flavum)。对其胞外蛋白酶活性进行了比较深入的研究。 该菌能在以酪蛋白为底物的蛋白酶检测固体培养基上形成明显的水解晕圈,证明该菌具有很强的蛋白酶水解酶活力。通过研究证实:该菌的胞外蛋白酶活力在对数期以前随着细菌细胞浓度的增大不断增强,在对数生长末期约14h左右酶活达到最大;该酶的最适作用温度为50℃;适当浓度和特定种类的金属离子能够促进该酶的酶活;微量(2.5mM)金属离子螯合剂EDTA便可对该酶产生很强的抑制作用(抑制率达60%以上),当螯合剂EDTA浓度达到100 mM时酶活基本完全被抑制;反应体系的pH能够极显著的影响该酶的活力,酶的最适pH值为4左右。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 曾桂超;;应用动物温度敏感变种细胞分离鉴定真核基因[J];生物工程学报;1988年04期
2 晋爱兰;猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定[J];山东畜牧兽医;2005年01期
3 韦月平;;白假丝酵母的形态及理化鉴定[J];辽东学院学报(自然科学版);2006年02期
4 陆奇能;朱宏杰;洪健;金伟;张凡;鲁兴萌;;一株传染性软化病病毒的分离和鉴定[J];病毒学报;2007年02期
5 刘君寒;王兆守;何健;王保战;李顺鹏;;一株氯氰菊酯降解菌的分离和鉴定[J];南京农业大学学报;2007年03期
6 张洪英;司微;高艳;刘立奎;崔尚金;王宇;;犬瘟热病毒强毒株的分离与鉴定[J];中国预防兽医学报;2007年08期
7 郭剑英;梁群超;李开江;赵洪杰;杨红;;雏鸡大肠杆菌的分离与鉴定[J];江西畜牧兽医杂志;2007年05期
8 解英波;姚静;乌日罕;特木尔巴根;马利峰;于富丽;李平安;申之义;;内蒙地区牛乳中布鲁氏杆菌的分离鉴定[J];中国动物检疫;2008年02期
9 苑学;邢欣;龙淼;逄晓阳;刘国文;孙国权;王哲;;牛瘤胃液中链球菌的分离与鉴定[J];中国畜牧兽医;2009年05期
10 郭向飞;金敏;陈照立;李君文;;人胎肝干细胞的分离培养、鉴定及mRNA转录分析[J];生物技术通讯;2009年03期
11 邓洪宇;王璐璐;侯广玉;杨玉英;;奶牛阴道嗜酸乳杆菌的分离鉴定[J];现代畜牧兽医;2009年07期
12 孙永科;杨玉艾;孔令富;毕保良;冷春永;冷思明;;非典型性型猪瘟病毒云南株的分离鉴定及其E0/E2基因序列分析[J];中国动物传染病学报;2009年03期
13 蒋桃珍;刘月焕;林健;韩春华;潘洁;赖平安;韦海涛;祝俊杰;赵景义;马志军;毕丁仁;;2007年华北地区H3N8亚型马流感病毒的分离与鉴定[J];中国兽医学报;2010年05期
14 张宇;王铁峰;钱爱东;;猪、牛源非结核分枝杆菌的分离与鉴定[J];吉林畜牧兽医;2010年07期
15 陈慧婧;简永利;涂宜强;林应兴;;鸽新城疫病毒的分离与鉴定[J];福建畜牧兽医;2010年04期
16 朱晓文;夏咸柱;高玉伟;邬红全;刘红侠;苗志刚;井玉香;李志刚;胡广祥;张忠湛;姜秋杰;胡桂学;;甲型H1N1流感病毒长春株的分离鉴定及其分子进化分析[J];中国病原生物学杂志;2010年12期
17 陈国开;李婉雁;臧莹安;;广东部分地区猪场猪链球菌的分离与鉴定[J];仲恺农业工程学院学报;2010年04期
18 赵朋;王少华;;一株典型新城疫病毒的分离鉴定[J];中国动物保健;2011年04期
19 李雪林,李采娟;人类遗传病致病基因的分离鉴定[J];国际遗传学杂志;1987年04期
20 黄学斌;朱文杰;郑幼霞;;两株海洋发光细菌的分离鉴定[J];华东师范大学学报(自然科学版);1992年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王晓丽;夏花;朱宏建;高必达;;朝鲜蓟上一种萎蔫病的病原分离与鉴定[A];粮食安全与植保科技创新[C];2009年
2 廖成水;程相朝;吴庭才;张春杰;李银聚;郁川;王晓利;胡阿勇;;河南省鸡源沙门氏菌新近流行株的分离鉴定及其耐药性分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
3 黄瑜;程龙飞;李文杨;苏敬良;庄向生;;鸭疱疹病毒Ⅱ型(暂定名)的分离鉴定[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年
4 岳华;汤承;刘群;罗薇;刘内生;杨小农;龙虎;;“鸭传染性肿头症”病毒的分离及部分特性研究[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2002年
5 付少才;陈万荣;周珍辉;周育森;;猫泛白细胞减少症病毒的分离与鉴定[A];全国兽医外科学第13次学术研讨会、小动物医学第1次学术研讨会暨奶牛疾病第3次学术讨论会论文集[C];2006年
6 雷爱莹;彭敏;曾地刚;李咏梅;;高效净水沼泽红假单胞菌的分离和鉴定[A];广西水产研究所论文集(2001—2005)[C];2006年
7 金曙光;霍鲜鲜;乌仁塔娜;;半干青贮中优良乳酸菌的分离鉴定[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
8 吴忆春;魏建忠;王桂军;李郁;;超强毒鸡传染性法氏囊病病毒安徽株的分离鉴定[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(下)[C];2005年
9 周珍辉;陈万荣;付少才;周育森;向双云;曹授俊;;猫泛白细胞减少症病毒的诊断[A];京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛论文集[C];2008年
10 李文兵;胡昌江;黄勤挽;谢秀琼;;盐炙益智仁中5-羟甲基糠醛的分离鉴定[A];中华中医药学会中药炮制分会2009年学术研讨会论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 程霜;石榴皮萃取物抗氧化和降血脂作用与成分研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
2 吕本强;注射用双黄连粉针剂物质基础研究[D];第一军医大学;2007年
3 刘利;桑叶次生代谢产物研究[D];中国农业科学院;2005年
4 胡申才;具细胞毒活性海洋微生物的分离筛选及次级代谢物的研究[D];华中农业大学;2005年
5 张明明;Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定和生物学特性研究及重组禽腺病毒的构建[D];扬州大学;2008年
6 常继涛;牛轮状病毒病原流行病学调查、基因重配毒株的构建及二价减毒株的免疫原性评价[D];中国农业科学院;2009年
7 金光;海洋拮抗菌JG1的分离鉴定、应用及热激蛋白DnaK的保护机制初探[D];中国海洋大学;2010年
8 王(韦华);猪源乙型脑炎病毒SXBJ07株全长基因组克隆分析及ELISA检测方法的建立[D];西北农林科技大学;2009年
9 惠明;枯草芽孢杆菌B53的分离鉴定及产聚γ-谷氨酸的研究[D];中国农业大学;2005年
10 易晓华;除虫菊内生真菌分离、鉴定及其代谢产物抑菌活性研究[D];西北农林科技大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 董靖;无指盘臭蛙皮表金黄杆菌分离鉴定及其胞外蛋白酶研究[D];南京农业大学;2007年
2 卢彦欣;狂犬病病毒街毒株BDRV的分离鉴定及全基因组序列测定[D];吉林大学;2007年
3 蔡秀磊;鸭疫里默氏杆菌耐药性与耐药基因研究[D];山东农业大学;2007年
4 白永平;绵羊肺炎支原体的分离鉴定与敏感药物试验的研究[D];四川农业大学;2007年
5 曹娟;生物表面活性剂产生菌的分离鉴定及其对环境污染物生物降解的促进作用[D];南京农业大学;2008年
6 郁宏伟;猪伪狂犬病毒的分离鉴定及检测方法的建立[D];河北农业大学;2005年
7 马清义;大熊猫消化道正常菌群的分离鉴定及药敏性研究[D];西北农林科技大学;2006年
8 杨胜祥;金叶子的化学成分研究[D];西北农林科技大学;2007年
9 严泽华;鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗的研制[D];吉林大学;2007年
10 朱子洁;石家庄地区猪链球菌的分离鉴定及其快速检测方法的建立和应用[D];河北农业大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 邵文杰;昆明植物所古植物化学研究获新进展[N];光明日报;2004年
2 李忠将刘雪梅;茅台集团建立我国第一个白酒微生物菌种资源库[N];经理日报;2008年
3 衡水市武邑县蔡徐农技信息中心 蔡占奎;冬季谨防鸭感冒[N];河北农民报;2008年
4 郑灵巧;我国流感病毒活动未见明显增强[N];健康报;2008年
5 河南农业大学 史莹华 博士;危机动物健康的致命“暗箭”[N];中国畜牧兽医报;2006年
6 甘肃农业大学 王锡祯 教授;猪呼吸道病综合征(PRDC)的流行动态及控制措施[N];中国畜牧兽医报;2006年
7 江苏农科院 邵国青 研究员 博士生导师;变异病原“重组武功”超强[N];中国畜牧兽医报;2007年
8 满红;冬季防治鸭感冒5招[N];河北农民报;2007年
9 国家质检总局标准法规中心 苏志明;警惕黄曲霉毒素的危害[N];中国国门时报;2006年
10 河北省动物疫病预防控制中心 李志民 刘红;秋冬育雏谨防葡萄球菌病[N];河北科技报;2006年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978