收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

离子注入生防菌Bs-916高效突变菌株选育及其拮抗作用分子机理研究

李德全  
【摘要】: 枯草芽孢杆菌生防菌Bs-916能有效控制水稻纹枯病,具有拮抗谱广,生长快,产生抗生素,对水稻有抗性诱导作用的特点,是一种在水稻病害防治中发挥作用的生防因子。离子注入作为一种诱变源,具有突变率高、突变谱广等特点。离子注入作为一种复合诱变,比单一诱变更有效。 为进一步提高、稳定拮抗菌Bs-916的防病能力,本研究利用离子束作为诱变源对生防菌Bs-916进行诱变处理。利用不同剂量的N~+对Bs-916进行处理,确定最佳的离子注入参数。经过三次诱变处理,第1次在30~250×2.6×10~(13)N~+/cm~2之间选取6个剂量注入,分别为30、60、90、120、150和250×2.6×10~(13) N~+/cm~2;第2次在第1次离子注入基础上,在90~800×2.6×10~(13) N~+/cm~2之间选取8个剂量注入,分别为90、120、150、200、250、400、500和800×2.6×10~(13) N~+/cm~2;第3次选取150×2.6×10~(13) N~+/cm~2和250×2.6×10~(13)N~+/cm~2 2个剂量注入。在1300个诱变处理的菌株中,经过初筛、复筛和定量筛选,获得31个拮抗能力比出发菌株Bs-916提高8%以上的菌株,其中11个菌株的拮抗能力提高10%以上。离子注入生防菌Bs-916的最适剂量为150×2.6×10~(13)N~+/cm~2~250×2.6×10~(13) N~+/cm~2,筛选到的这些高效突变菌株均在这个剂量范围内,使用该范围内的剂量进行筛选,可获得较高的正变异率,并且变异的稳定性也较好。 以纹枯病原菌为指示菌筛选到的高效突变菌株,在室内测定对8种不同植物病原菌的拮抗能力,结果表明,高效突变菌株与出发菌株Bs-916比较,对不同病原菌拮抗能力均有不同程度提高,拮抗带宽提高率为4.3%~7.9%。室内对纹枯病原菌抑菌和田间防病测定。盆栽试验结果表明,5个突变菌株对水稻纹枯病防效为84%~87.4%,均好于Bs-916的防效(72.4%),防效提高率为11.6%~15%,其中K33、H74、J71和E73等4个菌株表现较强的抑制纹枯病能力,病斑大小均低于3.0cm。田间小区试验结果表明,4个突变株校正防效为80.55%~82.87%,防病效果比Bs-916高3.2%~19.1%。 生防菌Bs-916及其突变菌株抗菌物质的提取,TLC和HPLC定性、定量分析比较。TLC分析表明,出发菌Bs-916和高效突变菌株分泌的粗脂肽类化合物和纯品表面活性素(surfactin)的Rf值均为0.52;HPLC分析表明,纯品surfactin具有两个异构体的流出峰,出发菌Bs-916和突变菌株分泌的粗脂肽类化合物也有两个流出峰,以纯品的两个峰为对照,Bs-916及其突变菌株和纯品的surfactin具有相同的洗脱时间,HPLC定性分析结果说明:出发菌Bs-916和突变菌株分泌的粗脂肽类化合物为surfactin。以纯品surfactin 1mg/mL含量为标准进行峰面积比较,出发菌Bs-916和突变菌株H74,J71分泌的surfactin分别为1.231mg/mL,3.332mg/mL,2.115mg/mL。HPLC定量分析结果说明:高效突变菌分泌的表面活性素含量比出发菌有较大幅度的提高。Bs-916和突变体Bs-H74分泌surfactin的调控基因克隆、DNA序列分析比较结果表明,surfactin合成的启动子基因序列一些碱基发生了改变,这些改变的碱基可引起surfactin分泌量的变化。 通过分析生防菌Bs-916及其突变菌株的拮抗性能和分泌surfactin能力的关系发现:离子注入后拮抗性能提高的突变菌株,分泌surfactin的能力也提高;拮抗性能降低的突变菌株,分泌的surfactin能力也降低,说明Bs-916的拮抗性能与分泌surfactin能力具有相关性。室内抑菌结果表明,表面活性素能抑制水稻纹枯菌丝生长,引起原生质泄露。 以在植物抗病中起重要作用的过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和多酚氧化酶(PPO)等为主要指标,对水稻接种纹枯病菌、Bs-916和突变株后,三个酶活性变化比较结果表明,拮抗菌Bs-916及其突变菌株分泌活性物质对水稻具有抗性诱导作用;4个高效突变株比出发菌Bs-916对三个酶活性影响大;同时接种拮抗菌和纹枯病菌比单一接种拮抗菌、纹枯病菌对三个酶活性影响大。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 赵秀香;赵柏霞;马镝;魏颖颖;吴元华;;枯草芽孢杆菌SN-02抑菌物质的分离、纯化及结构测定[J];植物保护学报;2008年04期
2 李晶;杨谦;;生防枯草芽孢杆菌的研究进展[J];安徽农业科学;2008年01期
3 高学文,姚仕义,Huong Pham,Joachim Vater,王金生;枯草芽孢杆菌B2菌株产生的抑菌活性物质分析[J];中国生物防治;2003年04期
4 张建宁;;耐热α-淀粉酶产生菌枯草芽孢杆菌抗噬菌体的选育[J];安徽农业科学;2009年12期
5 李海峰;叶永浩;郭坚华;;枯草芽孢杆菌7Ze3环二肽的分离与鉴定[J];江苏农业科学;2010年02期
6 王帅;高圣风;高学文;王娜;王光强;;枯草芽孢杆菌脂肽类抗生素发酵和提取条件[J];中国生物防治;2007年04期
7 赵彩艳;李庚飞;尤跃钧;李忠建;程茂基;;氮离子注入选育β-葡聚糖酶高产菌株的研究[J];饲料研究;2008年03期
8 张吉鹍;刘林秀;邹志恒;储怡士;李龙瑞;;生物发酵法制备大豆多肽菌种的筛选及大豆多肽在饲料配方中的应用[J];饲料与畜牧;2008年01期
9 王大威;张健;姜伟;张凤久;;一种快速分离检测产脂肽类生物表面活性剂枯草芽孢杆菌的方法[J];生物技术通报;2011年09期
10 鲁小城;赵宇华;方萍;;枯草芽孢杆菌F-2抗植物病原真菌活性物质的研究[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);2007年01期
11 林多多;居正英;王明江;张昕;林玲;袁生;周益军;;茄子黄萎病生防内生细菌Jaas ed 1产生的抑菌物质特性初步分析[J];江苏农业科学;2009年06期
12 高学文,齐放军,姚仕义,王金生;枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的共培养及其对生物活性物质产生的影响[J];南京农业大学学报;2003年03期
13 李国婧,姜树原,吴自荣,王水平,王瑞刚;转枯草芽孢杆菌纤溶酶基因对烟草氧自由基和保护酶系统的影响[J];中国农学通报;2005年02期
14 邱旺;张东杰;;枯草芽孢杆菌apr基因表达载体的构建[J];黑龙江八一农垦大学学报;2010年02期
15 孙晓宇;沈卫荣;韩丽萍;路鹏鹏;门欣;;枯草芽孢杆菌BSK1抗菌物质的初步研究[J];陕西农业科学;2010年06期
16 杨锋;章亭洲;;枯草芽孢杆菌生物学特性的研究[J];饲料研究;2011年03期
17 李瑞芳;薛雯雯;黄亮;熊前程;王彬;;枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及质粒转化方法研究[J];生物技术通报;2011年05期
18 韩继宏,阮宜兵,黄志诚;枯草芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用[J];渔业致富指南;2002年22期
19 王振华,潘康成,张均利,杨金龙;枯草芽孢杆菌制剂在奶牛生产上的应用研究[J];饲料广角;2005年19期
20 卢剑;饶锐;刘模发;;微生物以菌克菌在葡萄上的应用[J];湖北植保;2006年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘桂君;孟佑婷;杨素玲;尚宏忠;;生防菌枯草芽孢杆菌的辐射诱变研究[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
2 蒋思婧;马立新;;枯草芽孢杆菌的寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
3 李华;沈立荣;冯凤琴;李铎;;细菌型豆豉发酵菌株的鉴定[A];2009食品科技(北京)论坛会议指南[C];2009年
4 杨明明;;枯草芽孢杆菌高效表达系统的构建[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
5 钟娟;周金燕;李志东;雷宝良;谭红;;一种新型抗菌肽——捷安肽素的研究[A];中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2005年
6 游银伟;尤升波;岳寿松;;枯草芽孢杆菌YYW-1蛋白酶缺陷株诱变与筛选[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
7 亓雪晨;齐俊生;王琦;梅汝鸿;;枯草芽孢杆菌启动子片段的克隆及其在绿色荧光蛋白标记中的应用[A];中国植物病理学会2006年学术年会论文集[C];2006年
8 刘辉;魏祥法;井庆川;刘雪兰;刘瑞亭;石天虹;;一株枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化[A];第三届第八次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集[C];2006年
9 孙璐;文欣;谭英;李贺阳;赵月芳;牛聪伟;席真;;原卟啉原氧化酶及其突变体的酶学性质研究[A];中国化学会第26届学术年会化学生物分会场论文集[C];2008年
10 冀志霞;钱风光;陈守文;;西瓜枯萎病生防菌的筛选与鉴定[A];粮食安全与植保科技创新[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李德全;离子注入生防菌Bs-916高效突变菌株选育及其拮抗作用分子机理研究[D];南京农业大学;2007年
2 李翌;表面活性素在溶液中胶束化行为的研究[D];华东理工大学;2011年
3 佘安奇;水溶液中表面活性素的胶束结构与聚集行为的研究[D];华东理工大学;2012年
4 王帅;芽孢杆菌及其脂肽类化合物防治植物病害和促进植物生长的研究[D];南京农业大学;2009年
5 陈凤莲;小麦麸皮中低聚木糖的生物制备技术研究[D];东北林业大学;2006年
6 齐东梅;药食源芽孢杆菌的分类鉴定及枯草芽孢杆菌H110抑菌特性研究[D];中国农业大学;2005年
7 刘静;表面活性素与生物大分子之间相互作用的研究[D];华东理工大学;2010年
8 吴小平;食用菌致病木霉的鉴定、致病机理及防治研究[D];福建农林大学;2008年
9 张清霞;甘露寡糖诱导抗病反应初步研究及枯草芽孢杆菌甘露聚糖酶基因的克隆与表达[D];中国农业大学;2005年
10 薛书文;溶胶凝胶法制备ZnO基薄膜及离子注入研究[D];电子科技大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 徐晶;弹性蛋白酶发酵生产条件优化及性质研究[D];东北农业大学;2008年
2 石岩;欧文氏杆菌突变体的构建及枯草芽孢杆菌甘露聚糖酶基因的克隆和表达[D];中国农业科学院;2010年
3 吴宝昌;枯草芽孢杆菌混合发酵制备豆粕饲料的研究[D];山东轻工业学院;2010年
4 郭小华;枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)R21-4细菌素的研究[D];中国农业大学;2003年
5 徐广军;枯草芽孢杆菌BS_(3-1)对小麦赤霉病(Fusarium graminearum)的生物防治研究[D];四川农业大学;2003年
6 莫宏春;枯草芽孢杆菌6-磷酸葡萄糖脱氢酶的分离纯化和部分性质[D];四川大学;2003年
7 蒋培霞;枯草芽孢杆菌α-淀粉酶基因的克隆、表达和分析[D];河南农业大学;2004年
8 邹立扣;枯草芽孢杆菌WHNB02植酸酶phyC基因在大肠杆菌中的表达及玉米表达载体的构建[D];四川农业大学;2004年
9 赵瑞;枯草芽孢杆菌TU100的发酵条件以及抗菌物质的研究[D];中国农业科学院;2006年
10 周红梅;生防枯草芽孢杆菌mRNA差异显示分析[D];黑龙江大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 黄中;用途广泛的离子注入技术[N];中国知识产权报;2001年
2 ;浅谈枯草芽孢杆菌在水产养殖上的应用[N];中国海洋报;2003年
3 江苏省淡水水产研究所研究员 徐在宽 江苏省海洋与渔业局工程师 仇丽;复合型枯草芽孢杆菌活菌生物净水剂在特种水产养殖中的应用探讨[N];科技日报;2001年
4 本报记者 仇方迎;还水体以清新[N];科技日报;2001年
5 河北远征药业 赵茂华王东军;早期仔猪断奶后常见问题及对策⑤[N];河北农民报;2007年
6 本报记者 李德辉 通讯员 王静 实习生 王远;生命在创造中闪光[N];联合日报;2006年
7 水清;活菌剂在农业生产上的应用[N];江苏农业科技报;2008年
8 本报记者 李德辉 通讯员 马永军;创新因执着而美丽[N];联合日报;2008年
9 ;蛋白酶[N];中国畜牧兽医报;2008年
10 钱虎君 盖钧镒 喻德跃;选育专用大豆品种促进加工科研升级[N];农民日报;2002年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978