低密度脂蛋白受体3′非翻译区单核苷酸多态性对黄连素调节低密度脂蛋白受体表达的影响

【摘要】：目的:黄连素(Berberine,BBR)作为一种新型降胆固醇药,在临床上已得到广泛的应用,现已探明BBR是通过作用于低密度脂蛋白受体(Low Density Lipoprotein Receptor,LDLR)基因的3′-非翻译区(3′-untranslated region,3′-UTR)序列发挥功能,BBR是通过增加LDLR mRNA的稳定性,延长LDLR mRNA的半衰期,进而增加LDLR的表达,表现为很好的降胆固醇作用。研究表明,LDLR基因的3′-UTR区5′端一个1100bp的片段是BBR作用的靶点。但在临床治疗实践中发现高胆固醇血症患者对BBR的降胆固醇效应存在明显的差异。本实验旨在于探讨LDLR 3′-UTR区的单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)与血脂水平的关系,并且进一步明确LDLR 3′-UTR区的SNPs对BBR调节LDLR表达的影响。 方法收集113例高脂血症患者作为试验组(EG组),120例血脂正常的健康者作为对照组(HC组),采集外周静脉血3ml测定血脂水平,5ml外周静脉血分离外周单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC)用于提取基因组DNA,并采用PCR直接测序的方法对LDLR 3′-UTR区的1100bp目的片段进行SNP分析;另外,本研究依据人群中SNP等位基因的频率分布情况将LDLR 3′-UTR的多态性分成5种不同的基因型(TypeⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ),并构建了携带不同基因型的荧光素酶报告基因载体(pLuc-UTR),转染HepG2细胞,采用双荧光素酶分析方法检测BBR作用12h后pLuc-UTR的活性变化,进而探明不同基因型对于BBR作用效果的影响。 结果研究人群的LDLR 3′-UTR检测到G44243A、G44332A、C44506G、G44695A、C44857T及A44964G 6个SNP位点,没有发现其它的SNP位点。根据基因频率分布分成TypeⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ5个类型。分析结果表明,这些基因型频率对血脂水平没有影响(P0.05),携带有不同SNP基因型的荧光素酶报告基因在BBR作用后LDLR基因表达明显增加,但是携带不同SNP基因型的报告基因表达增加程度相似,因此,LDLR 3′-UTR区的SNP位点对BBR上调LDLR基因表达没有影响。 结结论 1.在研究人群中,LDLR 3′-UTR的基因型频率对血脂水平没有影响; 2. LDLR 3′-UTR区的基因型频率及其分布的遗传性变异并不能影响BBR对 LDLR表达的上调作用,此可为临床使用黄连素进行高脂血症的治疗提供理论依据。