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东亚钳蝎毒素多肽对大鼠背根神经节神经元离子通道的作用

安珊珊  
【摘要】:第一部分:东亚钳蝎毒素多肽对PC12细胞的毒性作用 采用CCK-8法观察东亚钳蝎毒素多肽(Buthus martensi Karsch polypeptides224,BmK224)对PC12细胞的毒性作用。浓度为3、10、30、100、300和1000μg/mL的BmK224溶液与PC12细胞共同孵育24h后,CCK-8法检测显示各个浓度组吸光度A值无明显变化,与对照组比较无显著性差异(P0.05)。结果表明,在3~1000μg/mL的浓度范围内,随着浓度的增高,BmK224无抑制细胞增生的作用。 第二部分:东亚钳蝎毒素多肽对神经元动作电位的作用 以大鼠背根神经节(Dorsal Root Ganglion,DRG)神经元为标本,运用全细胞膜片钳技术在电流钳记录模式下,成功记录到动作电位(action potential,AP)后,加入40μg/ml BmK224,观察其对AP的作用。发现其使单个AP的时程延长,幅值减小。 第三部分:东亚钳蝎毒素多肽对神经元钠通道的作用 以大鼠DRG神经元为标本,研究BmK224对TTX敏感型(tetrodotoxin- sensitive,TTX-S)和TTX非敏感型(tetrodotoxin-resensitive,TTX-R)钠电流(I_(Na))的作用。结果表明:BmK224以浓度依赖和电压依赖的方式抑制TTX-S I_(Na)和TTX-R I_(Na)。40μg/ml BmK224使TTX-S I_(Na)激活曲线和失活曲线均向超极化方向移动,衰减时间常数τ变大,复活时间延长,可激活通道数目增加,使TTX-R I_(Na)激活曲线向去极化方向移动,失活曲线向超级化方向移动,衰减时间常数τ变大,复活时间延长,可激活通道数目减少,这可能是导致DRG神经元兴奋性降低,AP发放频率和幅值减小的原因。 第四部分:东亚钳蝎毒素多肽对神经元钾通道的作用 以大鼠DRG神经元为标本,运用膜片钳技术研究了BmK224对电压门控钾离子通道的作用。结果表明:80μg/ml BmK224对全钾电流(I_K)、延迟整流钾电流(I_(KDR))无明显作用。


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