收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

AF-2364的精子制动作用及机制研究

王晖  
【摘要】:Contraception on demand (即时避孕法),不同于传统的避孕药丸或各种宫内节育器等(IUD)避孕方法,是仅在需要时才采用的避孕方法,包括屏障类避孕方法(安全套等),事后避孕法,各种杀精子剂等。而各种杀精子剂因其除了能阻止妊娠,还可在一定程度上防止各种性传播疾病的扩散,并具有女性自主选择使用的优点,在15-25岁的青少年中尤为重要,是目前避孕方法研究的又一热点。 比较理想的杀精子化合物应当集杀精子和抗各种微生物感染的作用于一体,且安全耐受,副作用轻微。但这只是理想目标,目前还不能要求某种化合物既有强有效的杀精作用,又有很好的抗病原微生物的作用,杀精子剂领域的研究也并不完全是找到一种上述两个效果兼得的药物,更重要的是找到更为有效的在数秒种内,有选择性的使100×106–200×106精子制动,而没有局部或全身反应,其高度特异性及有效性才是关键。 以抑制精子运动为杀精子剂靶点符合避孕药物研究符合上述条件,是很有希望的研究方向。位于精子尾部中段(mid-piece)线粒体鞘经三羧酸循环(TCA)产生ATP是精子的常规活动(activated motility,或简称为Motility)的重要能量来源,并且是帮助精子穿过女性生殖道,到达输卵管的主要力量。因此作用于线粒体的化合物很可能是杀精子剂的重要候选成分。 抗肿瘤药Lonidamine (LND)可作用于肿瘤细胞线粒体的膜通透转运孔(mitochondrial permeability transition (PT) pore,又称膜通透转运孔复合物,PTPC),引起肿瘤细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,ΔΨm)降低,进而诱导肿瘤细胞细胞凋亡。LND曾被认为是一种较强的精子发生抑制剂,但因其强烈的肝、肾毒性而放弃其在抗生育领域的应用。AF-2364是Lonidamine的衍生物,功能类似,其毒副作用显著降低,37.5–50 mg/kg b.w.的AF-2364一周内给药2–5次强饲法即可有效在实验大鼠体内诱导出暂时可恢复的抗生育作用,目前被作为一种很有潜力的男性口服避孕药候选化合物。 进一步的研究显示,AF-2364可干扰精子细胞与睾丸支持细胞间的黏着(AJ)连接,通过一系列信号传导通路,引起骨架蛋白(Actin)的聚集与解聚,使支持细胞与精子细胞间的黏附功能降低,可逆地诱导精母细胞及精子细胞从生精上皮丢失,导致给药大鼠不育。其他的相关研究多在此通路上的深入细化阐述,或以AF-2364诱导生殖细胞从生精上皮的丢失为体内模型,研究AF-2364作用后支持细胞与生精细胞间细胞连接的动力学改变。目前关于AF-2364抗生育作用的研究集中于睾丸当中,以精子细胞与睾丸支持细胞间连接为主,并未涉及其对于精子功能的影响;其次,研究以大鼠为主,也有有关家兔等其他物种的报道,暂时没有其对人类的直接影响。介于AF-2364与其类似物LND在其功能上的相似性,我们想了解AF-2364是否可以通过与LND作用于肿瘤细胞类似的机制影响人精子的线粒体PTPC,使线粒体功能下降,从而影响人类精子功能,进而在杀精子剂领域有一定的药用价值。本课题就此进行了一系列研究,探讨AF-2364作为一种杀精子剂的侯选成分的可能性,初步阐明其作用机制,并将结合相应的动物实验,将AF-2364制成阴道栓剂,观察其抗生育作用,评估其实际临床应用价值。 体外实验发现,72μM的AF-2364可以显著抑制人精子的运动,精子的总活率及a级精子百分比在实验组及对照组间有显著性差异;并且在24μM,48μM,72μM,96μM的不同作用浓度下显示出剂量及时间倚赖性关系,可能可以发展为一种杀精子剂的侯选成分。 进一步的研究发现,72μM AF-2364作用后线粒体ΔΨm显著下降,经流式细胞仪检测线粒体膜电位正常精子百分比较对照组显著降低,且阳性精子的平均电位强度也显著低于对照组;加用线粒体PT pore开放抑制剂环孢菌素(CsA)发现AF-2364对精子的制动作用可得到部分恢复;精子ATP荧光素酶检测实验发现72μM AF-2364作用后实验组精子ATP含量显著低于对照组,且精子的存活率在实验组与对照组间没有显著差异,而96μM AF-236472作用后15mins,精子存活率小于30%。上述结果提示72μM AF-2364可通过与Lonidamine相似的机制作用于线粒体膜PT pore,抑制线粒体能量代谢功能,使ATP产生下降,从而使精子制动。而在较高剂量时,AF-2364可能是触发了精子的凋亡程序,最终使精子死亡。 我们同时检测了已经报道的AF-2364对细胞骨架一系列蛋白调控通路在人精子中的变化并对72μM AF-2364作用后15mins的人精子蛋白进行了蛋白质组学比对,未见显著差异;提示AF-2364作用后精子制动现象并不主要通过相关蛋白质表达或修饰水平的改变。在上述基础上,我们以BALB/c小鼠为模型,验证了AF-2364对小鼠精子的制动作用,并制备了AF-2364阴道凝胶进行了初步的交配实验,结果显示小鼠妊娠率下降。 综上所述,本研究的意义在于:1)体外实验发现, AF-2364可以显著抑制人精子的运动,是一种杀精子剂的候选成分;2)对其精子制动的分子机制进行了研究,基本阐明其作用机理。AF-2364可通过与其类似物Lonidamine相似的机制作用于线粒体膜PT pore,抑制线粒体能量代谢功能,从而使精子制动;在较高剂量时,AF-2364可能触发了精子的凋亡程序,最终使精子死亡;3) AF-2364阴道Gel可以使BALB/c小鼠妊娠率下降,提示AF-2364可能可以发展阴道栓剂,具有一定的临床应用潜力;4)研究过程中建立并完善的精子JC-1染色结合流式细胞仪检测技术扩展了精子功能的分子诊断技术,结合本实验室现有基础,已经具备临床开展的条件。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 苏华,郭仁舆;土贝母皂甙作为阴道杀精子剂的实验研究[J];西安交通大学学报(医学版);1986年03期
2 张英姿;杀精子剂-壬苯醇醚研究进展[J];滨州医学院学报;1995年02期
3 刘玉环,赵亚南,曹霖,吕加国,沙金燕,王昭梅,蒋雪涛;非表面活性杀精子剂SM—3体内抗生育研究[J];生殖与避孕;1997年05期
4 菲琳;;壬苯聚醇-9预防HIV感染无效[J];国外医学情报;2002年10期
5 胡宜彰,郭启栋,朱吉锦,赵志忠;壬苯醇醚-9的研制[J];中国医药工业杂志;1994年03期
6 蔡汾岚;;有效的杀精子剂:壬苯基聚乙氧基乙醇[J];国外医学情报;1982年17期
7 赵玉纹;应用溶血方法评价体外杀精子剂的效力[J];国外医学.计划生育分册;1983年01期
8 巢心明;;消毒剂氯化苯甲烃铵(benzalkonium chloride)是效果良好的杀精子剂[J];国外医学情报;1980年23期
9 周继铭,苏芹;杀精子外用避孕中草药的研究[J];中成药;1988年11期
10 胡宜彰,王美怡,杨云华,宋时,钱丽娟,许光贞,张敏贤,李美茹;壬苯醇醚_(-9)(NP_9)栓避孕效果的研究[J];中国计划生育学杂志;1994年06期
11 束怀德;;试验杀精子剂的特殊要求[J];国外医学.药学分册;1974年03期
12 丁以斌;;用性交后试验来测定避孕效果[J];国外医学.妇产科学分册;1979年02期
13 刁筱辉;;介绍国外两种新型的非离子型表面活性剂阴道杀精子避孕药物的药理和临床试验研究[J];国外医学.妇产科学分册;1980年01期
14 王民;郭仁舆;;水溶性醋酸棉酚作为杀精子剂的研究[J];中国男科学杂志;1988年01期
15 苗乃周,郭仁舆;AES杀精作用及其对精子超微结构的影响[J];西安交通大学学报(医学版);1991年02期
16 贾瑞鹏,周性明,陈甸英;川楝子油体外杀精子研究[J];南京铁道医学院学报;1995年04期
17 慕慧,杜俊杰;白头翁皂甙体外杀精效果研究[J];西北药学杂志;1996年03期
18 邵振堂,蔡启航,陈春华,汪悦,林远珊,刘邺,陈嘉政;壬苯醇醚避孕失败后的子代初步观察[J];生殖与避孕;1990年02期
19 王民,郭仁舆;扁桃酸的体外杀精子研究[J];西安交通大学学报(医学版);1988年04期
20 刘玉环,赵亚南,王昭梅,曹霖;非表面活性杀精子剂SM-3的体外杀精研究[J];生殖与避孕;1996年03期
中国重要会议论文全文数据库 前7条
1 秦路平;郭志学;郑汉臣;;体外杀精子剂的天然药物资源[A];中国自然资源学会全国第三届天然药物资源学术研讨会论文集[C];1998年
2 孙丽文;陈文颖;许文明;陈璋辉;李坤;倪崖;陈小章;石其贤;;AF-2364用于男性避孕的药效学及其作用机制[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年
3 邵长凤;张颖;陈坚;沈丽琳;;高效液相法测定双功能复方阴道栓中杀精子剂的含量[A];第十五次全国色谱学术报告会文集(下册)[C];2005年
4 朱琪;;微生物杀灭剂用于预防艾滋病性传播的重要意义[A];全国性与生殖医学学术研讨会论文汇编[C];2004年
5 金保方;孙大林;;男性避孕的研究进展[A];2011·中国医师协会中西医结合医师大会论文集[C];2011年
6 金保方;孙大林;;男性避孕的研究进展[A];中华中医药学会第十一届男科学术大会论文集[C];2011年
7 金保方;孙大林;;男性避孕的研究进展[A];第七次全国中西医结合男科学术会议及全国中西医结合男科提高班论文汇编及讲义[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 王晖;AF-2364的精子制动作用及机制研究[D];南京医科大学;2009年
2 牛志宏;环境和遗传因素导致男性不育分子机制的相关研究[D];复旦大学;2010年
3 宋成义;若干猪精子功能基因克隆及其mRNA在生殖道和成熟精子中的表达特性研究[D];扬州大学;2010年
4 卞廷松;聚精颗粒对弱精子症患者顶体酶、核蛋白组型转换、CDY基因和CatSper基因的实验及临床研究[D];南京中医药大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 钱晓;九子生精汤治疗肾精亏虚型少精子、弱精子症的临床研究[D];湖北中医药大学;2011年
2 张科;精子蛋白质AKAP4、GAPDHS和SPANX与A23187诱发顶体反应率在人工授精中的临床应用价值[D];中南大学;2011年
3 张贝贝;大叶蝉亚科昆虫生殖系统的形态及超微结构研究[D];西北农林科技大学;2012年
4 王亚男;生精散上调精子特异性钙通道CatSper治疗弱精子症的临床与实验研究[D];山东中医药大学;2012年
5 郭凯华;何首乌饮对衰老雄性大鼠睾丸生殖功能的影响[D];承德医学院;2010年
6 张振辉;不明原因不孕患者精子的精—卵相互作用实验及IVF临床结局的研究[D];中南大学;2010年
7 刘瑞风;精液对母兔免疫和子宫孕向发育的影响[D];天津农学院;2010年
8 廖芝健;中药辨证治疗肾虚型弱精症的临床观察[D];广州中医药大学;2011年
9 唐艳;消抗灵Ⅰ号对抗精子抗体阳性转阴的临床研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
10 易成;人精液凝固蛋白I衍生合成肽Sg I-52与精子活动关系的初步研究[D];昆明医学院;2011年
中国重要报纸全文数据库 前7条
1 维加;生男生女:多余的话[N];民族医药报;2007年
2 本报记者 李晓宏;液体避孕套不是岁末谎言[N];健康时报;2003年
3 王熹;女性易被感染的危险期[N];中国中医药报;2006年
4 编译 杨孝文;男孩增多环境污染是祸首?[N];北京科技报;2005年
5 ;紧急避孕ABC[N];中国妇女报;2005年
6 杨教;男女比例失衡:环境污染惹的祸?[N];中国妇女报;2005年
7 劳;美批准首个激素节育环[N];医药经济报;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978