骨髓衰竭患者骨髓间充质干细胞异常的初步研究

【摘要】： 目的 研究骨髓衰竭患者包括再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)和骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)形态和生长特征以及多种细胞因子在mRNA水平的表达情况,探讨MSCs异常在AA和MDS发病机制中的作用。 方法 从AA和MDS患者骨髓中分离MSCs,进行体外培养,观察细胞形态特征,绘制生长曲线描述细胞生长情况。采用半定量RT-PCR方法在mRNA水平上检测AA和MDS患者MSCs的血管黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1),白介素-6(interleukin-6,IL-6),IL-1β,干细胞因子(stem cell factor,SCF),粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)的表达。采用实时定量PCR方法在mRNA水平上检测AA和MDS患者MSCs血小板生产素(thrombopoietin,TPO)的表达。 结果 研究发现AA患者骨髓MSCs的形态与正常对照组无异,均为梭形成纤维细胞样,但AA患者骨髓MSCs生长缓慢,集落形成时间及细胞融合达90%所需时间均长于正常对照组,P3代细胞增殖能力低于正常对照组。MDS患者的骨髓MSCs的形态、集落形成时间及细胞融合达90%所需的时间与正常对照组无明显差别,P3代细胞增殖能力与正常对照组无异。 AA患者与正常对照组相比较,黏附分子VCAM-1和ICAM-1的表达与正常对照组相比无差异(P0.05),造血因子IL-6与SCF的表达均明显低于正常对照组(P0.05),TPO的表达水平高于正常对照组(P0.05),但IL-1β的表达与正常对照组相比无明显差异(P0.05)。MDS患者与正常对照组比较,黏附分子VCAM-1和ICAM-1的表达与正常对照组相比无统计学差别(P0.05),造血因子SCF的表达明显低于正常对照组(P0.05),而IL-6,IL-1β和TPO的表达与正常对照组相比无统计学差别(P0.05)。AA患者与MDS患者相比较,造血因子IL-6的表达明显低于MDS组(P0.01),但黏附分子VCAM-1和ICAM-1,造血因子IL-1β,SCF和TPO的表达两组患者之间无明显差异(P0.05)。 各研究组均未见G-CSF mRNA表达。 结论 AA和MDS患者的骨髓MSCs的形态与正常对照组无异,但AA患者骨髓MSCs的生长速度和增殖能力明显低于正常对照组,而MDS患者骨髓MSCs的细胞形态、生长速度和细胞增殖能力与正常对照组相比无明显差别。AA和MDS患者骨髓MSCs VCAM-1和ICAM-1的表达无明显异常。AA患者骨髓MSCs IL-6、SCF和TPO与正常对照组相比可见明显异常,MDS患者骨髓MSCs SCF与正常对照也存在差异。证实AA和MDS患者MSCs存在一定的缺陷。