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Lamin B1在邻苯二甲酸二丁酯致大鼠尿道下裂发生中的表达变化

魏云飞  
【摘要】: 目的:利用邻苯二甲酸二丁酯(DBP)胚胎晚期暴露导致SD胎鼠尿道下裂发生的动物模型,验证Lamin B1在尿道下裂与正常胎鼠阴茎中的差异表达,以进一步探讨尿道下裂的发生机制。 方法:妊娠14~18d SD雌鼠20只,随机分为两组,实验组和对照组分别给予DBP 800mg/(kg·d)和大豆油2ml/d灌胃,孕期第19d (GD19),剖宫产后记录雄性胎鼠肛门生殖器距离(AGD)、出生体重(BW)及尿道下裂发生数,取雄性胎鼠阴茎,提取总蛋白,进行二维凝胶电泳分离和图像分析,筛选出的差异蛋白质点利用质谱技术进行鉴定,运用免疫印迹法和免疫组织化学方法分析Lamin B1的表达情况。 结果:共得到51个差异表达蛋白(t≥2.731,p0.05),其中21个通过质谱分析和SwissProt蛋白数据库检索得到鉴定,如Lamin B1、galectin-3、LDH-B等,这些蛋白主要与组织分化和生长调控等有关。尿道下裂组(实验组)AGD/BW与对照组相比有显著性差异(P0.05);尿道下裂发生率为40%;运用Western blotting,我们验证了Lamin B1在对照组的相对表达量为0.923±0.013(n=10),实验组为0.593±0.014(n=10),差异有统计学意义(P0.05);Lamin B1主要定位于尿道上皮细胞,对照组染色强度明显强于实验组。 结论:蛋白质组学方法为研究DBP的毒理机制提供了良好的平台,我们分离并鉴定出多个关键蛋白,DBP灌胃期间DBP改变了尿道组织中Lamin B1的表达,影响了细胞迁移和尿生殖褶的融合,这可能是尿道下裂发生的原因之一,本实验获得的其他蛋白质亦有待进一步验证及深入研究。


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