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培养基血清浓度对人表皮干细胞增殖分化的影响

李云剑  
【摘要】: 目的 比较不同血清浓度培养体系对表皮干细胞增殖分化的影响。 方法 采用两步酶消化法和Ⅳ型胶原差速贴壁相结合的方法获得人原代表皮干细胞,分别以0%、5%、10%、15%和20%血清浓度的培养基在96孔板中进行培养。观察表皮干细胞形态,克隆形成及增殖的情况,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞存活和生长情况,分析量效和时效关系;持续传代培养细胞,每次传代的同时取适量细胞,用免疫细胞化学的方法进行表皮干细胞和表皮细胞相应标志物(K19、K14和K10)的测定。 结果 表皮干细胞在各种血清浓度的培养基内均能形成克隆,增殖良好。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定,所得相同时间点各组OD值在统计学上没有差异(P0.05),表皮干细胞生长速度各组间无差异。第1代表皮干细胞K19均有表达,而K14和K10表达均为阴性;其后高血清浓度(15%、20%)培养基中细胞较低血清浓度(0%、5%)先出现K14、K10蛋白的表达;培养至第10代是各组细胞均出现K10高表达,而K19、K14表达阴性。 结论 在低血清浓度(0%、5%)的培养基中表皮干细胞生长良好,且能够相对较好保持表皮干细胞的特性。


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