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RNA干扰抑制CD147表达对人胰腺癌细胞Panc-1增殖、侵袭和吉西他滨敏感性的影响

渠利利  
【摘要】:目的:研究CD147 shRNA转染对人胰腺癌细胞Panc-1的CD147表达水平及对Panc-1细胞分泌MMPs、增殖、侵袭及耐药性的影响,并进一步探讨对体内肿瘤生长的影响。 方法: 1.将本实验室前期构建的重组质粒pSilencer-CD147shRNA稳定转染至Panc-1细胞中,采用荧光定量PCR及Western blotting法检测转染细胞中CD147表达水平的变化; 2.采用MTT法检测转染pSilencer-CD147shRNA后24、48和72h后Panc-1细胞增殖水平及对化疗药物吉西他滨敏感性的变化; 3.采用明胶酶谱法检测转染pSilencer-CD147shRNA对Panc-1细胞MMP-2、MMP-9活性的变化; 4.采用Transwell法检测转染pSilencer-CD147shRNA对Panc-1细胞体外侵袭能力的影响; 5.采用裸鼠皮下异种移植模型观察转染pSilencer-CD147shRNA对Panc-1细胞在体内肿瘤生长的影响,并采用免疫组化分析肿瘤组织CD147表达水平的差异。 结果:1.转染pSilencer-CD147shRNA后,Panc-1细胞中CD147的mRNA及蛋白表达水平显著降低,二条针对CD147不同位点的shRNA干扰效果分别为80.81%(P0.05)和34.58%(P0.05),并选择干扰效果较好的细胞克隆建立稳转株,用于下面的研究; 2.CD147 shRNA使Panc-1细胞在转染后24、48和72h的增殖能力显著下降至69.99% (P0.05)、70.95% (P0.05)、70.61% (P0.05);且对化疗药物吉西他滨的敏感性增高(P0.05); 3. CD147 shRNA转染Panc-1细胞后MMP-2、MMP-9水平降低(P0.05); 4. CD147 shRNA转染Panc-1细胞后其体外侵袭能力下降(P0.05); 5. CD147 shRNA使裸鼠皮下肿瘤的大小降低至27.86%(P0.05);且免疫组化分析肿瘤组织CD147的表达水平降低。 结论:1.成功筛选出CD147 shRNA干扰效果较好的稳转株; 2. CD147 shRNA能下调CD147的表达水平,并降低胰腺癌的增殖、侵袭能力,并提高对化疗药物吉西他滨的敏感性。


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