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高表达整合素连接激酶对阿霉素诱导心肌细胞凋亡的影响

孙静娴  
【摘要】:目的 体外培养乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞阿霉素损伤模型,观察高表达整合素连接激酶(integrin-linked kinase ,ILK)对阿霉素(doxorubicin, DOX)诱导的心肌细胞凋亡的影响及其可能的机制。 方法 体外培养乳鼠心肌细胞,原代心肌细胞培养72h后,选取生长良好的心肌细胞随机分为三组:①正常对照组:转染绿色荧光蛋白重组腺病毒(Ad-GFP);②阿霉素损伤组:转染Ad-GFP后,继续培养24h,再加入阿霉素(终浓度1umol/L)继续培养;③ILK转染组:转染ILK重组腺病毒(Ad-ILK)继续培养24h后,加入阿霉素(终浓度1umol/L)继续培养。阿霉素处理24h后,用原位末端缺口标记法(TdT-mediated dUTP nick end labding,TUNEL)检测心肌细胞凋亡率;提取阿霉素处理12h后心肌细胞的总RNA,应用实时荧光定量-聚合酶链反应法(real-time PCR)进行定量分析,检测心肌细胞Fas、FasL、Bax、Bcl-2 mRNA的表达水平。用SPSS17.0软件进行数据统计分析。 结果 1.与对照组相比,阿霉素损伤组、ILK转染组细胞凋亡率均明显高于对照组[ (22.88±7.75)%比(4.45±2.12)%, P0.01;(14.23±5.56 %)比(4.45±2.12)%,P0.01],而ILK转染组心肌细胞凋亡率较阿霉素损伤组明显降低[ (14.23±5.56)%比(22.88±7.75)%,P0.05]。 2.与对照组相比,阿霉素损伤组心肌细胞Fas、FasL、Bax mRNA的表达水平明显增高[Fas: (1.39±0.15)比(0.78±0.18);FasL:(0.69±0.25)比(0.11±0.02);Bax:(1.84±0.28)比(0.98±0.08);均P0.01],Bcl-2 mRNA的表达明显降低[ (0.14±0.02)比(0.98±0.02),P0.01];与阿霉素损伤组相比,ILK转染组心肌细胞Fas、FasL、Bax mRNA的表达水平明显降低[Fas:(1.14±0.12)比(1.39±0.15);FasL:(0.20±0.03)比(0.69±0.25);Bax:(1.29±0.21)比(1.84±0.28);均P0.05],Bcl-2 mRNA的表达明显增加[(0.16±0.01)比(0.14±0.02),P0.05]。 结论 心肌细胞凋亡是阿霉素心肌病的重要机制,利用高表达ILK基因的腺病毒转染大鼠心肌细胞,可以抑制心肌细胞凋亡,这种作用可能通过抑制心肌细胞Fas、FasL、Bax mRNA的表达并上调Bcl-2 mRNA介导。


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