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凋亡诱导因子在姜黄素诱导的大鼠肺成纤维细胞凋亡中的作用

陈玲玲  
【摘要】:目的 观察姜黄素对肺纤维化大鼠肺成纤维细胞增殖、凋亡的影响,研究凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)在肺成纤维细胞凋亡中的作用,为肺间质纤维化的治疗寻找新的作用靶点。 方法 气管内一次性注入盐酸博来霉素5.0 mg/kg,制备博来霉素致肺纤维化动物模型;第28天处死动物,取右肺上叶行HE染色评价肺组织炎症及纤维化改变,余肺组织予酶消化法体外分离培养肺成纤维细胞;细胞免疫组化鉴定肺成纤维细胞;体外培养的肺纤维化大鼠成纤维细胞,以未干预处理的肺成纤维细胞为对照组,分别于不同浓度的姜黄素(5μM、10μM、20μM和40μM)和caspase-3抑制剂Z-DEVD-fmk(20μM)孵育12h ,观测细胞生长状态变化;MTT检测成纤维细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;提取经上述实验处理的肺成纤维细胞蛋白, Western blot分别检测不同浓度姜黄素刺激12 h后各组细胞凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达及核转位。Western Blot实验重复3次,组间均值比较采用单因素方差分析,以P0.05认为具有统计学差异,以P0.01认为具有显着性差异。 结果 姜黄素能够抑制肺成纤维细胞,存在剂量依赖,提前以Z-DEVD-fmk(20μM)阻断caspase-3的活化,姜黄素不能完全抑制肺成纤维细胞的增殖;流式细胞术检测细胞凋亡,5~40μM姜黄素处理12 h,其凋亡率呈浓度依赖,与对照组相比,差异显著;而抑制caspase-3的活化,在姜黄素40μM组仍有细胞凋亡现象;Western-Blot结果显示,姜黄素处理组出现凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达与核转位,抑制caspase-3活性后未检测出细胞AIF蛋白表达。 结论 姜黄素可抑制大鼠肺成纤维细胞增殖,诱导其凋亡,可能与线粒体释放AIF有关。本实验为探讨姜黄素对肺间质纤维化的凋亡作用靶点提供了实验依据。


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