收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

吡喹酮抑制日本血吸虫病小鼠肝脏纤维化和炎症应答的作用及机制

梁越进  
【摘要】:日本血吸虫病造成的病理损伤主要是沉积在肝脏中的血吸虫虫卵形成的肉芽肿反应以及持续慢性感染引起的组织损伤修复过度,进而形成的肝脏纤维化。研究表明,血吸虫感染早期的炎症应答不仅介导了感染急性期虫卵肉芽肿的形成,还启动了纤维化相关细胞的活化和基因的表达。与其他病因导致的肝脏纤维化类似,血吸虫慢性感染引起持续的炎症反应造成肝星状细胞(HSCs)的持续激活,分泌大量胶原,同时胶原降解能力受到抑制,导致细胞外基质的大量沉积,形成肝脏纤维化。人群调查均发现,血吸虫病病原治疗之后,肝脏纤维化仍可持续发展,并可能导致肝硬化和肝癌而最终危及生命。因此,在病原治疗之后,进行抗炎治疗和抗纤维化治疗对于抑制过度的虫卵肉芽肿炎症反应和减轻随之而来的肝脏纤维化,阻止肝脏病变的持续发展是治疗血吸虫患者迫切需要的环节。 吡喹酮作为安全、有效的抗血吸虫药物已经应用了几十年。以往的研究表明,吡喹酮的杀虫治疗可以减轻血吸虫病肝脏纤维化的程度,其机制在于杀灭了成虫而减少了虫卵在肝脏的沉积。近年来,有研究者提出吡喹酮可能具有抗炎的作用,并可能直接作用于宿主的组织和细胞发挥药效。也有研究者提出吡喹酮也可能具有免疫调节作用。然而,吡喹酮能否直接抑制肝脏炎症和纤维化尚没有报道,其对宿主组织、细胞的作用及可能的作用机制也不明确。如果安全、廉价的吡喹酮具有抗炎或者抗纤维化的作用,那将可能提出治疗血吸虫病的新策略,并有可能成为有希望的抗炎或者抗纤维化药物,应用于其他疾病的炎症和纤维化病变中。 因此,本研究拟制作感染血吸虫不同时期小鼠肝星状细胞的基因芯片,期望通过分析从中寻找到血吸虫病致肝脏纤维化中的关键基因。同时,建立血吸虫感染小鼠急性期模型和慢性期模型,给予吡喹酮抗炎和抗纤维化治疗,评价吡喹酮的抗炎和抗纤维化作用。我们也建立CCL_4诱导的小鼠肝脏纤维化模型,给予吡喹酮抗纤维化治疗,以进一步明确吡喹酮的抗纤维化作用。此外,我们也进一步研究了吡喹酮对巨噬细胞和肝星状细胞的作用,从细胞水平揭示吡喹酮的抗炎和抗纤维化作用,探讨其可能的机制。为此,本文进行了以下几个方面的研究。 一、日本血吸虫病小鼠肝星状细胞表达趋化因子及受体的研究 我们利用基因芯片技术描绘了血吸虫病不同阶段小鼠原代肝星状细胞的动态表达谱特征,并着眼于肝星状细胞表达的趋化因子家族成员的动态变化,以Quantigene Plex System高通量技术对部分结果进行验证,再通过生物信息学分析描述其在血吸虫感染不同阶段可能的功能作用。我们也检测了吡喹酮病原治疗后血吸虫病小鼠肝星状细胞的基因芯片,通过与未治疗组的对比分析推测差异基因在肝脏纤维化转归中可能的功能作用。我们的结果显示,绝大多数的趋化因子及受体,如CXCL5、CCL5、CXCR2、CCR9、CCR7、CCL22、CCR1、CCR2、CCL8、CCL17等在感染3周小鼠HSCs中表达较正常对照组显著上调,预示着感染早期趋化因子可能介导了免疫细胞浸润和肝脏炎性免疫微环境的形成。感染6周小鼠HSCs中部分趋化因子,如CXCL9、CXCL10、CXCL11、CCR2、CCR5、CXCR3等的表达较正常对照组呈现显著的下调,这也提示在虫卵肉芽肿形成时期,肝脏内趋化因子呈现表达抑制的特征,这很有可能与大量沉积的虫卵释放的抗原有关,同时也避免机体因为过度的免疫应答而导致死亡。随着感染进入慢性期,HSCs表达的多数趋化因子,如CCL5、CCL8、CCL9、CCL21、CXCL5和CCR1等均呈现持续高表达的特征,这与血吸虫病慢性期肝脏纤维化的持续发展密切相关。在吡喹酮病原治疗后的小鼠HSCs芯片中我们发现,多数趋化因子都显著上调,如CXCL9、CXCL10、CCL3、CCL4、CCL5、CCR3、CCL24、CCL17、CCL22等,其很可能与肝脏纤维化的逆转相关,同时一些以的芯片结果初步揭示了在血吸虫病肝纤维化中可能发挥作用的趋化因子家族成员,为下一步的深入研究提供了有益的线索。此外,我们也在体外试验中初步证实了趋化因子CXCL9和CXCL10的抗纤维化作用,其可以抑制血吸虫感染小鼠肝脏非实质细胞表达胶原等纤维化相关基因的水平,也可以抑制TGF-β激活的人肝星状细胞系LX-2表达胶原等基因的水平,其作用的受体以及下游的信号通路还有待进一步研究,以全面的阐明趋化因子与血吸虫病肝脏纤维化的关系。 二、吡喹酮抗肝纤维化作用及其机制的研究 我们建立日本血吸虫病小鼠慢性期和晚期肝脏纤维化模型,并以吡喹酮进行长期抗纤维化治疗(30天)。我们发现与以往的病原治疗不同的是,吡喹酮长期抗纤维化治疗感染日本血吸虫8周和15周小鼠后,肝脏胶原的面积和羟脯氨酸的含量显著减少;慢性期肿大的脾脏明显缩小;血清ALT的水平降低;晚期门脉高压症也得到缓解,同时也抑制了HSCs激活水平以及纤维化相关基因的表达。吡喹酮长期抗纤维化治疗同样也减小了四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠肝脏胶原的面积和羟脯氨酸的含量,降低了血清ALT/AST的水平。我们的研究表明,吡喹酮具有直接的抗肝脏纤维化作用,并可能是通过抑制肝星状细胞的激活水平而发挥作用。 三、吡喹酮调节日本血吸虫病小鼠肝脏炎性应答的特征 我们建立日本血吸虫病小鼠急性期炎症模型,并以吡喹酮进行7天的抗炎治疗。我们发现与以往的病原治疗不同的是,吡喹酮抗炎治疗显著地抑制了肝脏炎性因子TNF-α、IL-6和趋化因子CCL2、CCL3、CCL5等基因的表达水平,发挥了抑制炎症反应的作用。体外试验也显示,吡喹酮可以抑制感染日本血吸虫小鼠肝脏非实质细胞和脾脏细胞炎性因子和趋化因子的表达水平。进一步的体外试验发现,吡喹酮可以抑制巨噬细胞表达炎性因子TNF-α的水平,这也可能是吡喹酮调节炎性应答的机制之一。 综上所述,本研究应用基因芯片技术描绘了日本血吸虫病不同感染阶段肝星状细胞的动态表达谱特征,并着眼于趋化因子在其中的功能作用,进行了生物信息学分析,初步研究了部分趋化因子对肝脏纤维化相关细胞的影响。同时,我们研究了吡喹酮可能的新作用,初步揭示了吡喹酮具有抗肝脏纤维化作用,以及对炎症应答的调节作用,为以吡喹酮作为抗纤维化和抗炎的药物应用提供理论依据。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 陈光贵,廖光生;吡喹酮治疗121例急性血吸虫病的临床观察[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;1984年03期
2 陈名刚,华湘津,余长葆,蒋寿柏;吡喹酮治疗血吸虫病引起过敏性哮喘1例报告[J];中国新药与临床杂志;1985年03期
3 毛协仁;吡喹酮治疗短膜壳绦虫病16例疗效观察[J];中国综合临床;1987年06期
4 张同延;吡喹酮治疗脾切除术后长期发热一例[J];中国血吸虫病防治杂志;1989年02期
5 但峻,廖光生,李孚全,冯永钦,袁兆国,李明春,陈景华;吡喹酮治疗111例急性血吸虫病临床观察[J];中国血吸虫病防治杂志;1992年05期
6 郭新民;180例吡喹酮治疗急性血吸虫病的观察及护理[J];护理学杂志;1994年01期
7 张玉琪,杨维金,赵志宏,杨晖,江应安,熊清先;吡喹酮治疗血吸虫病出现3例严重副作用[J];实用寄生虫病杂志;1995年04期
8 罗晓苏;吡喹酮治疗血吸虫病出现口腔溃疡一例报告[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;1996年01期
9 廖世业;吡喹酮治疗急性血吸虫病引起一过性幻觉1例[J];中国血吸虫病防治杂志;2000年05期
10 万子余,张卫国;大剂量吡喹酮治疗急性血吸虫病EKG、ALT的变化及分析[J];实用寄生虫病杂志;2001年01期
11 何中平;张磊;;超大剂量吡喹酮治疗急性血吸虫病例分析[J];医学动物防制;2007年09期
12 吴伟;黄一心;;吡喹酮治疗曼氏裂头蚴病1例[J];中国血吸虫病防治杂志;2009年06期
13 柴志武;徐乾成;;吡喹酮引起急性肾损伤1例[J];中国血吸虫病防治杂志;2011年02期
14 ;吡喹酮治疗华支睾吸虫病931例初步临床观察[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;1983年02期
15 汪光耀;吡喹酮治疗猪囊尾蚴病34例的临床效果[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;1985年01期
16 钟读敏,毕迟华,张名嵩,刘玉娥;吡喹酮治疗血吸虫病出现便血13例[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;1986年03期
17 杨红梅;吡喹酮和灭滴灵治疗蓝氏贾第鞭毛虫感染的疗效观察[J];新医学;1986年01期
18 黄一心,周明华,朱桂琴;吡喹酮治疗急性血吸虫病过程中肝脏进行性肿大两例报告[J];中国血吸虫病防治杂志;1990年01期
19 熊衍琨;吡喹酮治疗急性血吸虫病引起过敏性紫癜1例[J];中国血吸虫病防治杂志;1992年02期
20 张巧岚;吴全鑫;朱凤华;;吡喹酮治疗急性血吸虫病引起类赫氏反应的临床观察[J];公共卫生与预防医学;1992年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王光岳;刘平;殷秀;王庆华;;应用吡喹酮治疗埃及血吸虫病疗效观察[A];中国动物学会第八次全国寄生虫学学术讨论会论文摘要汇编[C];2001年
2 刘向东;;吡喹酮治疗脑囊虫病出现高颅压反应及处理[A];中华医学会全国第五次急诊医学学术会议论文集[C];1994年
3 陈刚;钱中希;;吡喹酮治疗对小鼠细粒棘球蚴形态学影响的动态观察[A];第五次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1988年
4 袁明珠;;吡喹酮治疗血吸虫病前后心电图变化的观察[A];第二届全国心功能学术研讨会论文摘要汇编[C];1990年
5 吴宏春;;家畜血吸虫病的治疗[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年
6 刘志刚;吴红艳;黄长军;;小儿肺吸虫病的诊断与治疗:附5例报告及文献复习[A];西北五省(区)第六届儿科学术交流大会论文汇编[C];2008年
7 宋鸿焘;李龙根;神学慧;田启安;纪长生;;血吸虫重复感染病人多次接受吡喹酮治疗效果评价[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
8 翟瑄;夏佐中;梁平;李映良;周渝冬;李禄生;;小儿脑型肺吸虫病的诊治[A];中国西南地区第九届小儿科学术会议论文汇编[C];2008年
9 傅松龄;龚方戚;解春红;朱卫华;汪伟;;小儿心包积液101例临床分析[A];第六届江浙沪儿科学术会议暨儿科学基础与临床研究进展学术班论文汇编[C];2009年
10 陈峰;蔡卫民;陈智;杨艳宏;翁红雷;刘荣华;;γ-干扰素抗血吸虫病肝纤维化作用的机理研究[A];中华医学会第七次全国感染病学术会议论文汇编[C];2001年
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 梁越进;吡喹酮抑制日本血吸虫病小鼠肝脏纤维化和炎症应答的作用及机制[D];南京医科大学;2011年
2 蔡茹;吡喹酮抗血吸虫的药物靶点及其作用机制研究[D];苏州大学;2010年
3 鞠川;基于功能基因组的日本血吸虫病诊断靶点的筛选和鉴定[D];华中师范大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 黄大可;吡喹酮及噁二唑类衍生物抗日本血吸虫作用的初步研究[D];安徽医科大学;2012年
2 张文龙;吡喹酮新衍生物的合成与乙烯利生产的工艺优化[D];山东大学;2013年
3 钱科;日本血吸虫吡喹酮抗性株的生物学特性及免疫病理的研究[D];江苏省血吸虫病防治研究所;2013年
4 王磊;吡喹酮蒸发透皮给药系统的研究及其应用[D];华中农业大学;2010年
5 曲国立;中国大陆日本血吸虫不同地理株对吡喹酮敏感性比较及其蛋白质组学差异分析[D];江苏省血吸虫病防治研究所;2010年
6 江艳;日本血吸虫幼虫体外移植及吡喹酮治疗前后感染血吸虫小鼠的免疫应答[D];安徽师范大学;2011年
7 邓雅丽;吡喹酮治疗华支睾吸虫病的临床分析[D];广西医科大学;2013年
8 吴勇权;荧光成像技术对部分抗血吸虫药物与日本血吸虫尾蚴的作用机理研究[D];赣南师范学院;2010年
9 陆乔;吡喹酮对刀豆蛋白A(Con A)致小鼠急性肝损伤的保护作用[D];南京医科大学;2013年
10 昌琼;5-硝基呋喃衍生物的合成及抗血吸虫的研究[D];赣南师范学院;2013年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 周耀华 刘平;用吡喹酮治疗血吸虫病[N];医药导报(中药报);2003年
2 本报记者 戴丹;一名乡医眼中的血吸虫病[N];医药经济报;2005年
3 刘虹;如何防治血吸虫病[N];家庭医生报;2008年
4 富农;几种僵猪的防治[N];河南科技报;2002年
5 黄勇缪峰;加强健康教育 防治绦囊虫病[N];大众科技报;2008年
6 本报记者 薛庆元;汛期谨防血吸虫病感染[N];中国消费者报;2003年
7 衣晓峰;吃生鱼片易惹虫缠身[N];健康报;2004年
8 周燕芬;放养水牛应注意血吸虫感染[N];江苏农业科技报;2010年
9 青岛大学医学院皮肤科教授 秦士德;“吉海反应”新识[N];健康报;2009年
10 记者 朱弼瑜;从“万户萧疏鬼唱歌”到“纸船明烛照天烧”[N];嘉兴日报;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978