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子痫前期孕妇胎盘和血清中氧化应激损伤与滋养细胞人类白细胞相关性抗原G表达的相互影响

周雪  
【摘要】:研究目的: 子痫前期是孕产妇和围产儿发病及死亡的重要原因。对其发病机制的研究一直是产科关注的热点。以人白细胞相关性抗原-G(HLA-G)表达下降为代表的免疫学说是子痫前期的经典病因,而以过氧化氢(H_2O_2)水平升高为特点的氧化应激学说亦是近年来其发病机制的重大进展,二者有无相关性,是否有潜在因果联系尚不明确。本研究将从分子生物学,细胞生物学等方面进一步探究:子痫前期胎盘和血清中过度氧化应激与滋养细胞上HLA-G表达有无相关性及表达HLA-G阳性的滋养细胞是否更容易受到氧化应激损伤。 研究方法: 1.(1)选择2008年10月-2009年10月南京医科大学第一附属医院住院产妇60例,其中正常妊娠组和子痫前期组各30例。采用比色法检测子痫前期和正常妊娠组胎盘组织中H_2O_2水平;采用免疫组化、Western Blot检测两组胎盘组织中HLA-G蛋白的表达水平;并对胎盘组织中H_2O_2水平与HLA-G蛋白表达水平进行相关性分析。(2)H_2O_2干预0h、24h、48h后,免疫荧光法和Western Blot分析滋养细胞株HTR-8/SVneo上HLA-G表达量变化。 2.(1)选择2010年6月-2010年12月南京医科大学第一附属医院发生重度子痫前期住院分娩产妇30例,其中早发型子痫前期组及晚发型子痫前期组各15例;选择门诊建卡晚孕产检的正常孕妇15例。采用比色法检测早发型子痫前期、晚发型子痫前期和正常妊娠组血清中H_2O_2水平;采用ELISA法检测三组孕妇血清中sHLA-G蛋白的表达水平;并对三组孕妇血清中H_2O_2水平与sHLA-G蛋白表达水平进行相关性分析(。2)H_2O_2干预0h、24h、48h后,ELISA法分析HTR-8/SVneo细胞上清中sHLA-G表达量变化。 3.(1) HLA-G siRNA和control siRNA寡聚核苷酸转染滋养细胞株HTR-8/SVneo,并采用Western Blot和RT-PCR验证干扰效果。(2)H_2O_2干预后,采用MTT法检测转染细胞的增殖能力;流式检测转染细胞的凋亡率;Transwell实验检测转染细胞的侵袭能力;明胶酶谱检测转染细胞侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9的活性改变。 研究结果: 1.(1)和正常产妇相比,子痫前期产妇胎盘组织中H_2O_2含量呈高表达,HLA-G蛋白呈低表达,并且H_2O_2含量和HLA-G的表达量呈负相关;(2)H_2O_2干预HTR-8/SVneo细胞后,干预组HLA-G蛋白表达量明显低于空白组,并且随着时间的延长而降低;荧光显微镜显示,干预组细胞中HLA-G表达强度亦明显弱于对照组。 2.(2)正常妊娠组、晚发型及早发型重度子痫前期孕妇血清中H_2O_2含量逐渐升高,sHLA-G蛋白表达量逐渐降低,并且H_2O_2含量和sHLA-G蛋白表达量呈负相关(2)H_2O_2干预HTR-8/SVneo细胞0h、24h、48h后,干预组sHLA-G分泌量明显低于空白组,并且随着时间的延长而降低。 3. H_2O_2干预后,和HLA-G siRNA组相比,control siRNA组细胞的增殖抑制率和凋亡率增高,侵袭能力和侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9的活性明显下降。 研究结论: 1.子痫前期中,高水平的H_2O_2会下调滋养细胞上HLA-G(包括sHLA-G)的表达。 2.表达HLA-G的滋养细胞更容易受到氧化应激损伤。


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