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长链非编码RNA 00152在胃癌发生、发展中的机制研究

周建平  
【摘要】:胃癌作为全球第四大癌症,严重威胁到人类健康,特别是对于发展中国家。世界每年胃癌新发病例近百万,发展中国家占近2/3,其中42%发生在中国。胃癌的早期诊断与治疗对患者的病情及预后至关重要,也是国内胃癌领域有待突破的主要研究方向。胃癌的发生发展涉及多基因异常调控、多步骤参与,最终使细胞生物学行为由正常演变为异常。研究发现胃癌发生发展与基因有着密切的联系胃癌体内的某些特定基因与正常人的基因相关比发生了变化,有可能这些变异的基因是导致胃癌的关键。当细胞行为异常是基于基因水平发生变化时,便可引发细胞结构和功能的不可逆性改变,很大可能造成细胞癌变。胃癌的远处转移及复发也是胃癌患者死亡的最主要原因,是影响临床疗效和预后的关键因素。深入研究胃癌的发病机制以及引起胃癌发生转移的具体分子机制,可以为探索新的诊断方法及靶向治疗位点提供坚实的理论基础,也为胃癌的早期诊断和预后评价提供依据。既往针对于胃癌发生发展的机制研究多集中于传统的蛋白编码基因,主要涉及遗传学,表观遗传学以及相关信号通路的调控。随着高通量测序技术发展,研究者已经揭示在人类基因组中非编码RNA(Non-coding RNA, ncRNA)比例占据了95%以上,蛋白编码RNA以及功能性非编码RNA间复杂相互作用在胃癌的发生发展中具有重要的作用。长链非编码LNA(long non-coding RNA, IncRNA)作为ncRNA的重要组成成分之一,也越来越受到重视。目前已经揭示lncRNA可以通过多种途径参与表观遗传,基因转录及转录后水平的调控,并且具有作为早期疾病诊断标记物的潜力。近年来,非编码RNA尤其是长链非编码RNA(Long non-coding RNA, lncRNA)在肿瘤的发生机制研究中越来越受到研究者的关注。目前为止,已有众多IncRNA被报道与肿瘤细胞增殖,侵袭转移及肿瘤复发高度相关。同样,在胃癌研究中,已有报道发现在胃癌组织与癌旁组织中具有明显差异表达的IncRNA谱,并且某些IncRNA,如H19,HULC可通过不同机制调控下游靶基因影响胃癌细胞的增殖或侵袭能力进而参与胃癌的发生发展。但目前关于IncRNA在胃癌中的研究尚停留在起步阶段,探索和发现新的IncRNA及其具体调控机制,可以为胃癌的发病机制研究提供新的理论依据。长链非编码RNA是指一类转录本长度大于200个核苷酸的RNA,位于细胞核内或胞浆内,不参与或很少参与编码蛋白,主要以RNA的形式在表观遗传、转录及转录后等层面上调控基因表达水平。LncRNA主要参与了基因组印记,染色体沉默以及染色质修饰、ml RNA转录激活、转录干扰,及转录后调控、核内运输、调节原癌基因活化等多种重要的cis-或trans-调控过程,它不但可活化某些蛋白编码基因表达,亦可以抑制蛋白编码基因的表达。目前研究进展已经揭示lncRNA具有作为疾病早期诊断标记物的潜力。本研究中我们利用生物信息学分析、表达谱芯片结合经典分子生物学技术等,在分子水平、细胞水平、实验动物水平以及临床样本中探索异常表达的长链非编码RNALinc00152对胃癌生物学行为的影响及机制。通过Affymetrix lncRNA microarray基因芯片检测三例胃癌患者癌与癌旁组织中lncRNA的表达水平,芯片结果显示:与癌旁组织相比,有271条lncRNA呈现不同程度的差异表达,提示lncRNA可能参与胃癌的发生发展。进一步确定芯片结果的可靠性,研究组再将其他学者已经报道的胃癌lncRNA表达谱结果采用针对差异lncRNA联合比对分析发现,有3条lncRNA在两组芯片中均有显著差异表达。其中,长链非编码Linc00152在两组芯片结果中差异水平最大,且各组内表达一致性较好,结果较稳定。研究组再以72例胃癌患者的癌组织和癌旁组织为实验样本,采用qRT-PCR进行Linc00152表达验证。结果发现,Linc00152在癌组织中呈现与芯片结果一致的高表达状态。结合患者的临床信息发现,Linc00152的表达水平与胃癌患者的肿瘤大小呈明显正相关关系,而与TNM分期及淋巴结转移等相关性不明显。提示linc00O152可能参与胃癌细胞增殖有关,据此,研究组删选出linc00152高表达的胃癌细胞株(HGC-27, MGC803)建立体外细胞模型进行后续功能机制研究。为明确Linc00152的亚细胞定位,研究组采用胞浆-胞核分离RNA提取方法,分别提取两种细胞细胞的细胞浆及细胞核内RNA,通过特异性反转录方法检测两种细胞亚单位内LincOO152表达水平,结果显示,Linc00152主要存在与细胞浆中,仅有少许在细胞核中表达。为明确该段序列符合长链非编码RNA的非编码特性,研究组采用生物信息学软件预测方法,确定其非编码的生物学特性。采用目前为止公认的长链非编码RNAMEG3作为阳性对照,结果显示,Linc00152呈现明显非编码特性。为探索Linc00152对细胞功能的影响,我们用shRNA研究Linc00152的敲除效果,用CCK8检测、EDU实验研究对细胞增殖的影响。再用体外实验验证Linc00152表达与肿瘤生长的相关性。用RNA拉下实验预测探索潜在的结合蛋白,并与反义Linc00152比较,发现位于约140 kDa附近的蛋白质丰富。进一步质谱鉴定表明,表皮生长因子受体是由Linc00152所捕获的蛋白质。为进一步探索Linc00152对EGFR具体调控机制,我们首先利用RNA免疫共沉淀技术(RNA Immunoprecipitation,RIP)探索Linc00152是否可以通过直接绑定EGFR蛋白进而影响其功能及相关效应产生。RIP研究显示Linc00152直接与EGF R蛋白结合。最终研究表明Linc00152可能通过EGFR依耐性信号通路促进胃癌细胞生长以及侵袭-转移级联反应,证明Linc00152在胃癌的发生发展中发挥着重要作用。综上所述,我们的研究对胃癌的发生发展,特别是肿瘤生长及转移中,功能性非编码RNA参与调控的机制进行了深入而广泛的探讨,为进一步理解该过程中纷繁复杂的信号通路提供了新的思路和视角,同时,为将来胃癌的早期诊断及靶向治疗提供坚实的理论基础。


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1 鲁慧英;Detection of hepatitis C virus RNA sequences in cholangiocarcinomas in Chinese and American patients[J];Chinese Medical Journal;2000年12期
2 ;Detection the HCV RNA by PCR-microplate hybridization method from clinical specimens[J];中国输血杂志;2001年S1期
3 付汉江,郑晓飞;类mRNA RNA研究进展[J];国外医学(分子生物学分册);2002年04期
4 Verheyden B ,徐其武;口服脊髓灰质炎疫苗核壳和RNA的稳定性[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2002年01期
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7 ;Potent and specific inhibition of SARS-CoV antigen expression by RNA interference[J];Chinese Medical Journal;2005年09期
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9 熊慧华;于世英;胡广原;庄亮;;Effects of Survivin Expression Suppressed by Short Hairpin RNA on MCF-7 Cells[J];华中科技大学学报(医学英德文版);2006年03期
10 杨益超;;RNA干扰及其在医学中的应用[J];广西医学;2007年10期
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15 鲁卓卿;李德奇;刘丽文;;RNA作用与应用的初步研究[J];生化药物杂志;1987年03期
16 李新兰;治疗性RNA编辑的研究[J];国外医学(分子生物学分册);1996年02期
17 ;IN SITU HYBRIDIZATION FOR DETECTION OF SOMATOSTATIN mRNA IN RAT TISSUES WITH DIGOXIGENIN-LABELLED ANTISENSE RNA PROBE[J];河南医科大学学报;1997年01期
18 ;Plasma HIV-1-RNA Load Determination by the Ultrasensitive Protocol:A Tool Necessary for the Management in Antiretorviral Treatment[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);1998年06期
19 殷凤峙,陈碧芬;Detection of hepatitis C virus RNA sequences in hepatic portal cholangiocarcinoma tisue by reverse t[J];Chinese Medical Journal;1998年12期
20 袁明,陆志檬,仇德琪,金根娣,赵力新;STUDY ON THE MOTHER TO INFANT TRANSMISSIONOF HEPATITIS C VIRUS BY COMBINED ASSAYOF ANTI-HCV AND HCV-RNA[J];Journal of Shanghai Second Medical University;1999年01期
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1 金由辛;;面向21世纪的RNA研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(下册)[C];1999年
2 ;第四届RNA全国研讨会大会报告日程安排[A];第四届全国RNA进展研讨会论文集[C];2005年
3 ;Function of Transfer RNA Modifications in Plant Development[A];植物分子生物学与现代农业——全国植物生物学研讨会论文摘要集[C];2010年
4 王峰;张秋平;陈金湘;;棉花总RNA的快速提取方法[A];中国棉花学会2011年年会论文汇编[C];2011年
5 关力;陈本楙;楊云虹;郭培芝;魏重琴;邱苏吾;苗健;;关于动物組織中RNA測定方法的研究[A];中国生理科学会学术会议论文摘要汇编(生物化学)[C];1964年
6 夏海滨;;小RNA在免疫学领域中的应用研究进展[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
7 ;The stability of hepatitis C virus RNA in various handling and storage conditions[A];中国输血协会第四届输血大会论文集[C];2006年
8 郭德银;;RNA干扰在病毒研究和控制中的应用[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
9 甘仪梅;杨业华;王学奎;曹燕;杨特武;;棉花总RNA快速提取[A];中国棉花学会2007年年会论文汇编[C];2007年
10 ;Identification and characterization of novel interactive partner proteins for PCBP1 that is a RNA-binding protein[A];中国优生优育协会第四届全国学术论文报告会暨基因科学高峰论坛论文专辑[C];2008年
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1 记者 冯卫东;研究人员发现可破坏肿瘤抑制基因的小RNA[N];科技日报;2009年
2 记者 储笑抒 通讯员 盛伟;人体微小RNA有望提前发出癌症预警[N];南京日报;2011年
3 泸州医学院副教授、科普作家 周志远;“大头儿子”与环状RNA[N];第一财经日报;2014年
4 麦迪信;小分子RNA可能有大作用[N];医药经济报;2003年
5 董映璧;美发现基因调控可回应“RNA世界”[N];科技日报;2006年
6 张忠霞;特制RNA轻推一下,就能“唤醒”基因[N];新华每日电讯;2007年
7 聂翠蓉;RNA:纵是配角也精彩[N];科技日报;2009年
8 冯卫东;RNA干扰机制首次在人体中获得证实[N];科技日报;2010年
9 冯卫东 王小龙;英在地球早期环境模拟条件下合成类RNA[N];科技日报;2009年
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