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调控HIF-1α对鼻黏膜上皮细胞生长因子表达的影响

李盈盈  
【摘要】:目的 研究采用短发夹RNA(shRNA)特异性沉默人鼻黏膜上皮细胞(human nasal epithelial cells, HNEC)缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α HIF-1α),观察其对HNEC表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、转化生长因子(transforming growth factor, TGF)β1、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF/fibroblast growth factor-2,FGF-2)三种生长因子的影响。方法取因鼾症行下鼻甲切除术患者的下鼻甲黏膜,体外培养原代细胞,体外设计合成以腺病毒为载体GFP标记的shRNA(包括ad-HIF shRNA及ad-HIF shRNA-neg).将细胞分为空白对照组、无义寡核苷酸阴性对照组(ad-HIF shRNA-neg)、ad-HIF shRNA干扰组、低氧培养组。蛋白质免疫印迹试验Western blot技术检测转染病毒后HNEC中HIF-1α、VEGF、TGF-β1、bFGF的蛋白的表达情况;RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) HIF-1α、VEGF、TGF-β1、bFGF的mRNA的表达情况。结果转染ad-HIF shRNA-neg前后,HIF-1α、VEGF、TGF-β1、bFGF的蛋白差异(q1=1.3167; q2=0.7513; q3=0.3251; q4=0.6592)及其mRNA差异(q1=2.3514; q2=37.0480; q3=17.1131; q4=1.0917)均无统计学意义(p0.05)。与阴性对照组及空白对照组相比,转染ad-HIF shRNA后,]BF-1α表达蛋白下降40%(q=31.4690),mRNA表达下降39%(q=16.5900),差异均有统计学意义(p0.05);同时VEGF. TGF-β1、bFGF的蛋白及mRNA表达也随之下降,蛋白差异(q1=19.1571;q2=33.8090;q3=45.8940)及mRNA差异(q1=22.3920;q2=17.8800;q3=11.5991)均有统计学意义(p0.05);与阴性对照组及空白对照组相比,低氧培养HNEC,其HIF-1α表达蛋白升高50%(q=32.3540),mRNA表达升高46%(q=15.4570)差异均有统计学意义(p0.05);同时VEGF.TGF-β1、bFGF的蛋白及mRNA表达也随之升高,蛋白差异(q1=20.2410;q2=35.2010;q3=47.3150)及mRNA差异(q1=21.4713;q2=18.3710;q3=10.3651)均有统计学意义(p0.05)。结论:特异性阻断HNEC的HIF-1α表达能够有效地抑制其VEGF, TGF-β1和bFGF的表达;低氧培养使HNEC中HIF-1α表达升高VEGR TGF-β1和bFGF的表达随之升高。表明HNEC中HIF-1α可能通过直接或间接途径调控着VEGF、 bFGF和TGF-β1的表达。


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