重症急性胰腺炎治疗的基础和临床研究

【摘要】： 急性胰腺炎(acute panereatitis,AP)尤其是重症急性胰腺炎(severe acute panereatitis,SAP)在当仍然威胁着人类的身体健康，依然是胰腺外科工作者争论和研究的热点问题。经过150多年的艰苦努力，虽然AP的研究无论在基础理论还是在临床治疗方法上均取得了突破性的进展，因此治愈率大大提高，但仍然困扰着广大医务工作者。 鉴于SAP的基础和临床研究的进展如胰腺滤泡细胞的变化、胰腺本身和胰外脏器的病理生理改变，本研究进行了有关这些方面的治疗SAP的基础和临床研究。 本论文由两部分组成： 第一部分 反义NF-KB P~(65)对大鼠实验性急性胰腺炎的作用及机理的研究 目的： 了解核转录因子NF-KB在实验性SAP模型动物的胰腺、肺脏和肾脏组织中的表达，以及反义NF-KB P~(65)对组织中NF-KB表达的影响、对SAP时胰腺的保护和治疗作用，探讨反义NF-KB P~(65)在SAP中的作用。 方法： ①模型的复制和严重度的判断：SAP模型的制备采用Aho等的方法即胆胰管内逆行注射5％的牛磺胆酸钠。②固相亚磷酸三酯法人工合成 南京医科大学博士学位论文 反义w－。B产’寡核菩酸及其对照序列正义收－。B产’寡聚脱氧核替 酸，Rat P‘。antlsense Number of bases：21，Dations：6456。硷 基序列：＊＞＊＊MC＊M＊＊＊＊＊＊＜y，并进行全硫代磷酸化 修饰，为基因治 疗做准备。＠观察反义 NF－。B P“对 NF－。B P“白对 一 制作用、反义 NF－。B P‘’对组织中 PLA；的作用：本研究采用腹腔内直 接注射反义和正义 NF－。B P‘’寡核菩酸于实验动物体内，应用免疫组 织化学方法门肥法）研究实验动物应用反义和正义呷－。B产’寡核 一 菩酸后 12、2小小时胰腺、肺脏和肾脏组织中 NF－。B P‘’和 PLA；的表 达，一抗分别为 NF－。B P‘’单抗和 PLA单抗，其工作浓度为 1：10 0， 用PBS代替一抗为空白对照表达结果。结果判断：细胞染色呈棕黄色 为阳性。阳性率计算方法：数5－10个高倍镜视野；分别计算阳性细 胞数和总兰胞数，P性率一阳性细胞数／总细胞数 XI 00％。＠评价反义 NF－。B P‘’对 SAP时相关细月因子表达水平的影响：应用 ELISA法坝 定 TNF a、IL－10、IL－6、IL－10、IL－2。⑤反义呷－。B P“寡核菩酸 应用后对％P时胰腺病理改变的影响：采用常规石蜡切片；HE染色， 高倍镜观察并用 Spormann法进行胰腺病理定量分析。＠反义w－。B P‘’对血清中胰酶活化的影响：用干生化测定血清淀粉酶和酸碱滴定法 坝定血清PLA＊ 结果： ①各组在12、24小时胰腺组织的病理检查结果：组2门3．6 t 2．6、21．4士 2．8）、组 3（20．7土 3．4、22．1土 1．5）组 4（8．70土 1．8、 9．20 t 2．3）、组5（14．7 ti．9、12．3 t 2．7），组2和组3之间比较胰 腺病变程度无明显差异，但组2与组4、组5以及组4和组 5的组内 一 和组间比较差异显著。③细胞固子的变化：在 12、24小时血清 TNF－ o（牦．7土1．3、卜．6土2．竹）U加1、工－lp（127土24、1托土盯） ng加工和 IL－6（248 t 34、351 26）pg加工白表达增力。，而 IL－2和 ”几刁 则未检测得到。给子反义呷－。B产‘腹腔注射后，预防组和治 疗组即组4和组5动物血清中促炎细胞因子的表达水平明显下降，它 丫 分别为 TNF－a（35．Iii．7、28．6 ti．61；3S．7 t 2．33、36．3 t 2．14） U／11，工－15（＊ 土14、79．4土22；94士＊、＊ 土＊．3）pg／＊ 工－6 （78 t 11、54 t 13；127 t 21、149 t 22）pg／。1。与 SAP组动物血清 2 南京医科大学博士学位论文 中相应细胞因子水平相比，差异明显（P＜O．OS）。且组4和组5比较， 差异亦显著。③NF－。B的表达：胰腺组织中 12、24，J、时组织中呷－ 。B产’表达的阳性细胞百分数的比较结果：三组胰腺组织中的表达： 组2（89．7土7．8、74．1土3．1）％、组4（36．8土4．1、23．2士9．2）％、 组5（抡．9。1．9、而．7。8．3）％；三组N卜。B产’表达的 尸性兰胞即 －活化率具有明显差异。胰外组织中NF－。B P”表达的阳性细胞情况： 月脏组织中呷－。BP’表达的阳性兰月：组2（67．4士u．1、59．7土 13．4）％、组 4（49．3 t 9．2、28．7 ti 5．7）％、组 5（42．9 ti．9、30．3 士 5 0）％；肾脏组织中 NF－。B P”表达的 F性圭月：组 2（59．9 iii．4、 47 4土13．1）％、组4（38．7土4．3、19．4士12．4）％、组5