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胰岛素样生长因子-1基因表达及临床试验研究

段宇  
【摘要】: 第一部分利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中高效表达人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)的研究 目的 利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中研制有生物学活性的可溶性分泌型重组人胰岛素样生长因子-1(rhIGF-1)。方法 将15kd人IGF-1(hIGF-1)前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒(BmNPV)转移载体pBakPAK8中,经与野生型病毒DNA共转染家蚕细胞后,通过体内同源重组的方式获得重组病毒BmNPV/IGF-1。以BmNPV/IGF-1感染5龄家蚕幼虫,分别在感染后24,48,72,96,108,120h提取家蚕血淋巴液,以 ELISA法测定不同时相家蚕血中IGF-1浓度,采用Western-blot分析鉴定IGF-1免疫学活性,MTT法观察其对NIH3T3细胞增殖的影响。结果 ELISA测定显示,BmNPV/IGF-1感染家蚕幼虫后,72h起蚕血中IGF-1浓度随感染时间延长而逐渐增高(19.09μg/ml~23.36μg/ml),120h IGF-1含量达到最高值(23.36μg/ml),Western-blot分析发现表达产物在蚕体内被加工成7.5kd成熟hIGF-1,并对NIH3T3细胞具有良好促增殖效应,其促细胞增殖能力明显优于来源于E.coli的IGF-1标准品。结论 利用家蚕杆状病毒载体实现具有生物学活性和免疫学活性rhIGF-1的高效表达。


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