Aquapporin adipose基因表达影响因素与临床研究

【摘要】： 目的： Aquaporin adipose(AQPap)是位于脂肪细胞膜上的甘油运转蛋白，它负责在脂肪分解时将甘油转运至细胞外参与血糖的维持。我们用适当的条件将3T3-L1脂肪前体细胞分化为成熟脂肪细胞，观察激素、营养成分、调脂药刺激对AQPap表达的调节作用，并研究人类脂肪组织AQPap表达量的变化与体重的关系，探讨AQPap表达的调节机制及其在肥胖、糖尿病发病机制中所起作用。 方法： 1、采用0.5mMIMX+1μM地塞米松+5μg／ml胰岛素诱导方案诱导分化细胞，并用油红O染色鉴定。 2、利用半定量RT-PCR及Western blotting技术，从基因及蛋白质表达水平研究激素(胰岛素、肾上腺素、地塞米松、IGF-1)、营养物质(葡萄糖、甘油)、调脂药(非诺贝特、洛伐他汀)对3T3—L1脂肪细胞AQPap表达的影响，并观察不同体重研究对象脂肪组织AQPap表达量的变化。 结果： 1、分化后的3T3-L1细胞由原来的梭形逐渐变为圆形，且细胞体积增大，胞浆内出现脂滴，到第9天，视野中95％以上细胞分化为典型的成熟脂肪细胞。油红O染色，成熟脂肪细胞的胞核为蓝色，胞浆内脂肪滴被染成橙红色。 2、与对照组相比，给予不同浓度的肾上腺素刺激分化成熟的3T3-L1细胞，AQPap mRNA的表达量并无显著变化(P＞0.05)。10~(-9)M胰岛素刺激细胞6小时可使AQPap基因表达下降16％，10~(-6)M胰岛 、一一～一 素使之下降超过 50％，48小时后 AQPap蛋白质水平较对照组下 降了 64o。IGF刁也降低 AQPap的基因表达，但相同浓度门－’M） 刺激下，IGFJ的作用要弱于胰岛素（P、0刀5）。地塞米松对AQPcy mRNA的表达量无明显影响，不过，同时给予 10‘M的地塞米松和 胰岛素与单用 10－‘M胰岛素相t卜 AQPap mRNA的表达量有所上升 （p＜0．05）。葡萄糖浓度的升高使 AQPap m洲A的表达量显著增强 （p、0＊5），16．smM葡萄糖刺激 48小时，AQPap mRNA表达量约 是对照组（葡萄糖浓度为5、6mM）的3倍；而蛋白质水平则上升近 一倍。甘油刺激对 AQPap mRNA表达无显著改变。调脂药非诺贝 特、洛伐他汀对 3T3工 l脂肪细胞 AQPap基因表达无直接影响 （P＞O刀5）。 3、肥胖及超重组的脂肪组织AQPap基因表达皆明显高于体重 正常组中州，05X超重组与8巴胖组之间无差异。Western blotting 结果表明，与体重正常组比较，只有肥胖组的脂肪组织 AQPap蛋白 质表达量明显增多（p川刀5），其它各组间无显著差异。 结论： 1、经过油红O染色鉴定，上述诱导分化方案能使细胞分化程 度均一，细胞分化成功率高，，％％以上由梭形前体细胞变为大而圆 白含有脂 滴白成熟脂肪细月。 2、胰岛素对 3T3土 脂肪细胞AQPaP的表达起抑制作用，并 呈剂量及时间依赖性。IG卜1也有抑余作用，但较胰岛素弱。肾上 腺素是。种脂解激素，它对AQp叩mRNA的表达无影响。地塞米 松能够桔抗胰岛素对 3T3土 脂肪细胞 AQpap基因表达的下调作 用。高糖状态下 AQPap mRNA及蛋白质表达明显增强。甘油及调 脂药非诺贝特、洛伐他汀对 3T3丁l脂肪细胞AQPaP基因表达无 直接影响。 3、人类肥胖患者脂肪组织 AQPaP表达是增强的；体重变化 与 AQPap表达异常有看密切关系。 ｝义 山京K村人二：M卜学位论文