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Aquapporin adipose基因表达影响因素与临床研究

周红文  
【摘要】: 目的: Aquaporin adipose(AQPap)是位于脂肪细胞膜上的甘油运转蛋白,它负责在脂肪分解时将甘油转运至细胞外参与血糖的维持。我们用适当的条件将3T3-L1脂肪前体细胞分化为成熟脂肪细胞,观察激素、营养成分、调脂药刺激对AQPap表达的调节作用,并研究人类脂肪组织AQPap表达量的变化与体重的关系,探讨AQPap表达的调节机制及其在肥胖、糖尿病发病机制中所起作用。 方法: 1、采用0.5mMIMX+1μM地塞米松+5μg/ml胰岛素诱导方案诱导分化细胞,并用油红O染色鉴定。 2、利用半定量RT-PCR及Western blotting技术,从基因及蛋白质表达水平研究激素(胰岛素、肾上腺素、地塞米松、IGF-1)、营养物质(葡萄糖、甘油)、调脂药(非诺贝特、洛伐他汀)对3T3—L1脂肪细胞AQPap表达的影响,并观察不同体重研究对象脂肪组织AQPap表达量的变化。 结果: 1、分化后的3T3-L1细胞由原来的梭形逐渐变为圆形,且细胞体积增大,胞浆内出现脂滴,到第9天,视野中95%以上细胞分化为典型的成熟脂肪细胞。油红O染色,成熟脂肪细胞的胞核为蓝色,胞浆内脂肪滴被染成橙红色。 2、与对照组相比,给予不同浓度的肾上腺素刺激分化成熟的3T3-L1细胞,AQPap mRNA的表达量并无显著变化(P>0.05)。10~(-9)M胰岛素刺激细胞6小时可使AQPap基因表达下降16%,10~(-6)M胰岛 、一一~一 素使之下降超过 50%,48小时后 AQPap蛋白质水平较对照组下 降了 64o。IGF刁也降低 AQPap的基因表达,但相同浓度门-’M) 刺激下,IGFJ的作用要弱于胰岛素(P、0刀5)。地塞米松对AQPcy mRNA的表达量无明显影响,不过,同时给予 10‘M的地塞米松和 胰岛素与单用 10-‘M胰岛素相t卜 AQPap mRNA的表达量有所上升 (p<0.05)。葡萄糖浓度的升高使 AQPap m洲A的表达量显著增强 (p、0*5),16.smM葡萄糖刺激 48小时,AQPap mRNA表达量约 是对照组(葡萄糖浓度为5、6mM)的3倍;而蛋白质水平则上升近 一倍。甘油刺激对 AQPap mRNA表达无显著改变。调脂药非诺贝 特、洛伐他汀对 3T3工 l脂肪细胞 AQPap基因表达无直接影响 (P>O刀5)。 3、肥胖及超重组的脂肪组织AQPap基因表达皆明显高于体重 正常组中州,05X超重组与8巴胖组之间无差异。Western blotting 结果表明,与体重正常组比较,只有肥胖组的脂肪组织 AQPap蛋白 质表达量明显增多(p川刀5),其它各组间无显著差异。 结论: 1、经过油红O染色鉴定,上述诱导分化方案能使细胞分化程 度均一,细胞分化成功率高,,%%以上由梭形前体细胞变为大而圆 白含有脂 滴白成熟脂肪细月。 2、胰岛素对 3T3土 脂肪细胞AQPaP的表达起抑制作用,并 呈剂量及时间依赖性。IG卜1也有抑余作用,但较胰岛素弱。肾上 腺素是。种脂解激素,它对AQp叩mRNA的表达无影响。地塞米 松能够桔抗胰岛素对 3T3土 脂肪细胞 AQpap基因表达的下调作 用。高糖状态下 AQPap mRNA及蛋白质表达明显增强。甘油及调 脂药非诺贝特、洛伐他汀对 3T3丁l脂肪细胞AQPaP基因表达无 直接影响。 3、人类肥胖患者脂肪组织 AQPaP表达是增强的;体重变化 与 AQPap表达异常有看密切关系。 }义 山京K村人二:M卜学位论文


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