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髓鞘碱性蛋白的提取纯化及实验性变应性脑脊髓炎动物模型的改良

林泓怡  
【摘要】: 为改良实验性变应性脑脊髓炎(Experimental Allergic Encephalomyelitis,EAE)动物模型,使其更接近于人的多发性硬化(Multiple Sclerosis,MS),本研究以人脑脊髓为原料,通过去脂、酸溶解、CM-52柱层析等步骤提取纯化了正常人脑脊髓的髓鞘碱性蛋白(Myelin Basic Protein,MBP)。随后,采用ELISA双抗体夹心和Western-blot相结合的方法对其进行了鉴定,证明该提纯蛋白具有纯度高、免疫活性好,能与抗MBP抗体特异性结合的特点。本研究用该提纯的髓鞘蛋白在Wistar大鼠诱导EAE并获得成功。该动物模型具有发病率高、病程较长、能自发缓解和接触相同抗原后有更明显的复发趋势的临床特点;其脑组织病理切片显示该模型大鼠的脑脊髓具有典型的脱髓鞘改变、胶质结节形成、血管“袖套状”改变和噬神经现象。其体内的免疫细胞在体外能特异性的识别髓鞘抗原产生较强的增殖反应,其血浆中的IFNγ、TNFα水平随疾病的加重而升高,IL-10水平随疾病的缓解而升高。这些病理学和免疫学改变均与人类的MS更具有相似性,是一种改良的动物模型,更适用于对MS的研究。在此基础上我们用免疫组织化学的方法初步证明趋化因子RANTES主要分布于其软脑膜下大静脉的内皮细胞和炎性浸润细胞的周围。


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