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卫氏肺吸虫重组抗原的制备及应用研究

刘剑南  
【摘要】: 目的 表达并纯化含有卫氏并殖吸虫(肺吸虫)原组织蛋白酶L基因(Pw1)的重组细菌Pw-1/pRSETB/BL21,用纯化产物以ELISA检测肺吸虫病患者、其它寄生虫病患者和正常人血清,评价其敏感性,特异性和应用前景。方法 通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组菌表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳,以卫氏肺吸虫成虫抗原免疫兔、正常兔、感染犬和正常犬、肺吸虫病患者和血吸虫病患者以及正常人血清做Western blot检测比较,以分步洗涤和透析等方法对表达产物包涵体进行纯化,纯化产物经氧化/还原型谷胱苷肽复性后即为重组蛋白抗原。用该重组蛋白抗原,以ELISA法检测肺吸虫、血吸虫、华支睾吸虫、囊虫和包虫病人以及正常人血清中相应抗体,并与卫氏肺吸虫粗抗原做比较。结果 重组菌的沉淀于约32ku处出现特异性蛋白条带,该条带只被卫氏肺吸虫成虫抗原免疫兔、感染犬和卫氏肺吸虫病患者血清所识别。经纯化复性后的重组蛋白32Ku包板做ELISA检测。结果显示,粗抗原特异性较差,其与其他寄生虫病患者和正常人血清交叉反应率分别为:血吸虫病11.43%,华支睾吸虫病4.84%,囊虫病3.22%,包虫病5.88%,正常人亦有6.67%的假阳性反应;而本研究所制备的重组蛋白抗原与上述患者及 南京医科大学颀士学位论文 正常人血清均无交叉反应,表明该重组蛋白抗原应用于肺吸虫病的免 疫诊断特异性较高。


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