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甘氨酸受体在ATP耗竭细胞保护中的作用及机制研究

潘超  
【摘要】:目的: 明确细胞ATP耗竭时,甘氨酸对细胞的保护作用是否由甘氨酸受体(glycine receptor, GlyR)所介导;观察细胞在ATP耗竭-“复能”过程中,其代谢、增殖活性变化的特点。为进一步揭示甘氨酸保护作用机制提供研究基础和新的思路。 方法: GlyR的配基对ATP耗竭细胞的保护作用。构建甘氨酸受体α1亚单位(GlyRα1)的真核表达载体pcDNA3.1(b),采用脂质体法(LipofectAMINETM 2000)将其与pEGFP-C1质粒共转染入缺乏天然GlyR的人胚胎肾细胞株(Human Embryonic Kidney 293,HEK 293)内,流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测细胞转染率,分别以RT-PCR及Western blot检测GlyRα1的mRNA转录及蛋白表达。野生型及转染GlyR的HEK293细胞处于ATP耗竭状态,观察甘氨酸、士的宁对细胞的保护作用。犬肾细胞MDCK(Madin-Darby Canine Kidney)作为对照细胞。光学显微镜及电镜观察细胞形态及超微结构改变。通过检测细胞乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)释放率、细胞膜对不同分子量标记复合物(分子量668Da的碘化丙啶、3kDa及70kDa右旋糖苷)通透性反映细胞膜完整性。通过台盼蓝染色观察细胞活性。


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