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人精子蛋白SP22单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及临床应用

王新刚  
【摘要】:精子蛋白22(sperm protein 22,SP22)是一种由常染色体的持家基因编码的蛋白。大鼠SP22主要分布于心、肺、脑、肝、肾、前列腺、睾丸、输精管、附睾等组织,以睾丸中含量最多。同样,人各组织均表达SP22,表达量较多的组织是心脏、肌肉组织、胰腺、垂体、肾上腺、甲状腺和唾液腺等。在精子发生过程中,SP22 mRNA在粗线期精母细胞、次级精母细胞和圆形精子期均有转录,但其蛋白却在精子发生后期出现。SP22作为一种新的生殖相关蛋白,既具有酶活性,也具有调节因子和致癌因子的特性。精子表面SP22能与透明带结合,辅助精子穿透卵细胞直接参与顶体反应。若建立SP22的免疫学检测方法并探讨其在男性生殖系统中的具体功能、作用机制以及与男性不育的关系等,就必须得到大量的纯化SP22抗原和相应的抗体。 本研究第一部分,应用已有的重组菌株诱导表达。并用镍离子亲和层析柱对重组SP22蛋白进行纯化,行SDS-PAGE鉴定,结果获得了高纯度较的SP22重组蛋白。 第二部分,采用杂交瘤技术将无分泌功能的骨髓瘤细胞SP2/0与分泌SP22抗体的小鼠脾细胞融合成杂交瘤细胞,利用瘤细胞无限增殖及免疫细胞分泌抗体的能力,大量制备针对SP22抗原的单克隆抗体(McAb)。首先以重组SP22作为抗原免疫BALB/c小鼠,免疫成功后取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,通过阳性克隆有限稀释法,得到3株IgG1类SP22 McAb的杂交瘤细胞株;再将生长良好的杂交瘤细胞接种到石蜡油预处理的BALB/c小鼠腹腔中,制备腹水型抗人SP22 McAb。酶联免疫吸附试验(ELISA)证明混合腹水的滴度可达1∶1000~1∶3200;Western印迹鉴定表明该McAb能特异性地结合精子膜蛋白中分子量(Mr)为22000的SP22。


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