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东亚钳蝎毒素活性多肽对PC12细胞钠离子通道的作用研究

李静  
【摘要】: 第一部分:东亚钳蝎毒素多肽对PC12细胞的毒性作用 采用MTT法观察东亚钳蝎毒素多肽对PC12细胞的毒性作用。2、8、32、128μg/mL的东亚钳蝎毒素多肽溶液与PC12细胞共同孵育24h后,MTT比色法检测显示各个浓度组吸光度A值明显降低,细胞增生抑制率(%)分别为3.39,11.82,26.65,69.38,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结果表明,在2~128μg/mL的浓度范围内,随着浓度的增高,东亚钳蝎毒素多肽抑制细胞增生的作用越明显。 第二部分:东亚钳蝎毒素多肽对PC12细胞膜电位的影响及其与钠通道的关系 应用荧光染料DiBAC4(3)标记的PC12细胞并在激光共聚焦显微镜上监测细胞膜电位的实时动态变化,观察终浓度分别为10、20、40μg·mL-1的东亚钳蝎(Buthus martensi Karsch,BmK)毒素多肽对其作用效果,以及钠通道阻断剂TTX(tetrodotoxin)预处理对毒素多肽膜电位效应的影响。结果表明:加入毒素多肽后PC12细胞膜电位呈去极化改变,3min后达到最大水平,5min内趋于稳定。各浓度组毒素多肽作用细胞3min后,所测得的标准化荧光强度值分别为1.375±0.048、1.504±0.034、1.839±0.022,和对照组相比差异均有显著性(P<0.01)。而1μmol·L-1 TTX与PC12细胞共孵育20min后再加入40μg·mL-1毒素多肽所测值为1.035±0.028,与对照组相比无显著差异(P>0.05),提示毒素多肽的膜电位效应可被TTX完全抑制。表明东亚钳蝎毒素多肽可引起PC12细胞膜电位去极化,且其效应在一定范围内随浓度增加而增大,钠通道可能参与了这一过程。


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