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淫羊藿苷对大鼠成骨细胞分泌蛋白质组学的影响

孙海涛  
【摘要】:目的:通过体外培养大鼠成骨细胞,应用蛋白质组学方法,探讨淫羊藿苷干预后成骨细胞分泌蛋白谱中蛋白质差异表达,以了解新表达的差异蛋白与淫羊藿苷促成骨的关系,为进一步研究淫羊藿苷促成骨作用机制和研制新的促成骨药物打下基础。 方法:采用酶消化法原代培养大鼠成骨细胞,将传代24小时后的大鼠成骨细胞分为淫羊藿苷干预组和对照组,在培养24小时末,分别收集两组上清液,用超滤离心-丙酮沉淀法富集培养液中的蛋白质,制备双向电泳(2-DE)样品,进行2-DE实验。通过2-DE图象分析软件比对两组细胞分泌蛋白的2-DE图谱,得到具有差异的蛋白,再通过基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行质谱分析,得到蛋白的肽质量指纹图谱(PMF),然后用Mascot软件查询Swiss-Prot数据库,鉴定蛋白的种类和性质。 结果:经过Image Master TM5.0软件分析发现,淫羊藿苷干预组与对照组的双向电泳图谱比对后有60个差异表达蛋白(11个表达下凋,49个表达上调):表达上调的蛋白分别是:Max(18kDa protein), Galectin-1, Phosphatidylethanol-amine-binding protein, Rho GDP dissociation inhibitor(GDl)alpha, Peroxiredoxin-6,Hemiferrin, Follistatin-related protein 1 precursor+y-actin, Macrophage-capping protein, Serpinfl 41 kDa protein,β-actin,Insulin-like growth factor-binding protein2 precursor, Alpha-enolase, Prolactin regulatory, element-binding protein, Npat_predicted 38kDaprotein,y-actin.STAM-binding protein,Dlecl 39 kDa protein, Isoform 1 of Heterogeneous nuclear ribonucleo proteinM,Sfrs2 29 kDa protein, Spetex-2E, Biphenyl hydrolase-like, T-complex protein 1 subunit theta, Ephrintype-Areceptor8, transglutaminase4, Syntaxin-binding protein2, Collagen alpha-2(I)chain precursor, y-enolase,Vimentin,ATP synthase subunit beta mitoehondrial precursor,protein disulfide isomerase family A, member 3,Argbp2 78 kDa protein,heat shock 60kDa protein 1,Heat shock cognate 71kDa protein,Lamin-A,inactive dipeptidyl peptidaselO,Collagen alpha-1(Ⅲ) chain precursor,Filamin-A,Serine-protein kinase ATM, LIM and senescent cell antigen-like-containing domain protein 1。其中,189、194、203号蛋白未成功鉴定出,169号蛋白的功能数据库暂搜索不到。表达下调的蛋白分别是:glutaredoxin5,Translationally-controlled tumorprotein,Myosin heavy chain-1, Phosphoglycerate mutase 1,6-phosphogluconolactonase, Cyfipl predicted 51 kDa protein,Sdha 72kDa protein,CAP-Gly domain-containing linker protein 2+Alpha-enolase。其中217号蛋白未成功鉴定出。有多个点鉴定为同一个蛋白,如3个点为Alpha-enolase,3个点位为γ-actin,2个点为β-actin, protein disulfide isomerase familyA, member3有2个点等,推测可能是这些蛋白存在不同的修饰,如磷酸化、甲基化修饰改变了其等电点和分子量或具有不同单体所致。 这些差异蛋白按功能分类主要属于细胞骨架蛋白、热休克蛋白及分子伴侣蛋白、RNA结合蛋白及转录剪切延伸相关蛋白、信号转导相关蛋白、抗氧化酶及中间代谢类酶等。结论:通过蛋白质组学研究方法,发现在淫羊藿苷干预下大鼠成骨细胞的分泌蛋白谱中有多种蛋白表达发生改变,其中有些分泌蛋白功能尚未知,丰富了大鼠成骨细胞蛋白质组的数据库,为进一步研究淫羊藿苷促成骨机理提供了可靠的依据。


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