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“补肾益肝活血方”对小鼠骨髓基质细胞成软骨分化相关基因表达的影响

徐文强  
【摘要】:目的采用血清药理学方法,从基因水平探索中药补肾益肝活血方影响BMSCs成软骨细胞分化的机制。 方法取45只昆明大鼠随机分为3组,补肾益肝活血方高、低剂量组分别以含14.67×4g生药/kg、14.67g生药/kg的水溶液2mL灌胃,对照组以等量生理盐水2mL灌胃,2次/d,连续给药3d后,腹主动脉采血制备血清。另从4只4周龄昆明小鼠骨髓中分离出BMSCs,贴壁法培养传代,取第3代BMSCs分为四组:对照组、阳性组及高、低剂量中药血清诱导组,依次以空白血清、成软骨诱导阳性药及高、低剂量中药血清诱导BMSCs成软骨细胞分化。HE染色观察各组软骨分化情况,基因芯片技术分析成软骨分化基因表达差异谱,并用Real time PCR验证。 结果¨E染色显示阳性组及高、低剂量中药血清诱导组均能促进BMSCs成软骨细胞分化。阳性组及高、低剂量中药血清诱导组中软骨细胞相关的MMP3、EFEMP1均为下调基因(下调倍数2)。Real time PCR示阳性组及高、低剂量中药血清诱导组中CollegenⅡ、 SOX9、 Aggrecan的表达均增高,表明三组均有软骨生成,且MMP3、EFEMP1的表达下降,进一步验证了基因芯片结果。 结论补肾益肝活血方含药血清能有效诱导BMSCs成软骨细胞分化,其作用机制很可能与MMP3、EFEMP1介导的通路有关。


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