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性激素与促性腺激素对卵巢癌SKOV3、OVCAR-3细胞体外生长的调控及其机制的研究

唐琛  
【摘要】:目的:卵巢癌的发病机制尚不明确,生殖激素对卵巢癌发生发展的影响一直存在争议,本实验研究生殖激素对卵巢癌细胞株的作用及可能机制,为探讨生殖激素在临床对卵巢癌的发生发展和对预后的影响、内分泌辅助治疗提供理论依据。 方法:将不同浓度雌激素(E)、孕激素(P)、人绒毛促性腺激素(HCG)作用于卵巢癌细胞株SKOV3、OVCAR-3,采用不同的实验方法观察细胞株的生长状况:(1)细胞增殖实验:利用四甲基偶氮唑兰(MTT)比色法检测细胞在24、48、72h的增殖情况;(2)流式细胞术检测用药后细胞早期凋亡率及细胞周期的改变;(3)实时荧光定量PCR检测两细胞株雌激素受体(ERα、ERβ)、孕激素受体(PRA、PRB)、人绒毛促性腺激素受体(LHCG) mRNA表达的差异,及用药后各组细胞EGFR、Bcl-2、Bax mRNA的表达情况。 结果:(1)各浓度的P和浓度为10-4mol/L的E对卵巢癌SKOV3、OVCAR-3细胞增殖均有抑制作用,且该抑制作用呈现时间、剂量依赖性,各浓度的HCG和浓度≤10-6mol/L的E对细胞增殖有促进作用,促进作用呈时间依赖性;(2)流式细胞术检测细胞周期发现:10-4mol/L P作用SKOV3细胞72h后大量细胞阻滞在G0/G1期,10-4mol/L的E作用SKOV3细胞72h后细胞周期分布以S期为主,浓度为750U/ml的HCG和10-6mol/L的E作用细胞72h细胞周期分布G2/M期略增多;(3)流式细胞术检测细胞凋亡发现:浓度为10-4mol/LP和10-4mol/L的E可促进SKOV3细胞凋亡,与对照组相比差异显著(P0.05),用药48h凋亡率分别为20%和50%;(4)ERa高农达的细胞株SKOV3对各浓度E的作用效果比低表达的OVCAR-3细胞更明显,PRB/PRA的比值高的细胞株OVCAR-3对各浓度P的作用效果较比值低的SKOV3细胞表现更显著,LHCGR高表达的和低表达的SKOV3用各浓度HCG48h后与对照组相比增殖显著,OVCAR-3增殖更显著(P0.01),刚药72h两细胞株均增殖显著(P0.01),且两细胞株存活率无明显差异;浓度为10-4mol/L的P和10-4mol/L的E作用SKOV3细胞72h,其EGFR、Bcl-2mRNA表达量与对照组相比显著下调(P0.01),Bax mRNA上调无统计学意义;浓度为750U/ml的HCG和10-6mol/L的E作用细胞72h其EGFR、Bcl-2mRNA表达量均上调显著(P0.05),BaxmRNA上调无统计学意义。 结论:P和高浓度的E能抑制卵巢癌细胞的增殖,其机制可能是通过将细胞阻分别阻滞于G0/G1期、S期,下调EGFR和Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的。HCG和低浓度的E能刺激卵巢癌细胞的增殖,其机制可能是通过上调EGFR和Bcl-2的表达而抑制细胞凋亡来实现的。ERα可能为E作用于卵巢癌细胞的主要受体;P可能主要通过PRB来发挥其抑制卵巢癌细胞生长的作用;LHCG除了通过LHCGR作用于卵巢癌细胞外还可能通过其他途径。


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