收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

天佛参口服液抗结肠癌的药效学研究及作用机制探讨

孙丽华  
【摘要】:[目的]评价天佛参口服液抗结肠癌的效应,并结合系统药理学初步探讨天佛参口服液发挥效应的物质基础和作用机制。[方法]1)在体外水平,利用MTT法考察天佛参口服液对8种人源性结肠癌细胞株(SW480、SW620、HCT-116、HCT-15、LS174T、colo-205、DLD-1、HT-29)增殖的抑制活性。研究中天佛参口服液设置的剂量均以生药量表示。2)在体内水平,建立人结肠癌细胞株HT-29裸小鼠细胞移植瘤模型,并通过肿瘤抑制率和相对肿瘤增殖率两种方法,评价天佛参口服液的体内抗肿瘤效应。研究中天佛参口服液设置的剂量均以生药量表示。3)检索中科院上海有机化物研究所中药与化学成分数据库(http://www.organchem.csdb.cn)、中药系统药理学数据库(http://tcmspnw.com)等数据库,收集天佛参口服液中已被报道的化学成分。并运用ADME/Tox虚拟计算系统,以OB≥30%,DL≥0.18为筛选条件,筛选天佛参口服液中的潜在活性成分。另外,部分活性成分,由于口服生物利用度或类药性等方面不满足要求,按照这种筛选方式将被剔除出去(即OB30%或DL0.18),而它们具有广泛的药理活性,包括抗肿瘤效应,是组方中药中的典型化合物,这部分成分也应该包含在潜在的候选活性化合物范畴之内。最终,整合这两部分的筛选结果,得天佛参口服液潜在的药效物质基础;运用药效团模型,基于支持向量机(SVM)算法和随机森林(RF)算法计算出各成分与相应靶点的相互作用强度,并以SVM≥0.8,RF≥0.7为筛选条件,虚拟预测天佛参口服液中各活性成分所对应的潜在作用靶点,构建潜在的药物作用靶点网络;通过检索并整合 DrugBank database(http://www.drugbank.ca/)、The Online Mendelian Inheritance in Man(OMIM)database(http://www.omim.org/)、Genetic Association Database(GAD)、Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)Pathway Database 以及 Therapeutic Target Database(TTD)(http://database.idrb.cqu.edu.cn/TTD/)等多个疾病靶点数据库,收集与结肠癌发生、发展及治疗紧密相关的靶点,构建已知的结肠癌相关靶点网络;运用Cytoscape软件的插件Bisogenet,并选择 InAct(www.ebi.ac.uk/intact/)、Human Protein Reference Database(http://www.hprd.org/)、Molecular interaction Database(http://mint.bio.uniroma2.it/mint/download.do)、Database of Interacting Proteins(http://dip.doe-mbi.ucla.edu/dip/)、Biological General Repository for Interaction Datasets(http://www.bind.ca)和 Biomolecular Interaction Network Database(http://thebiogrid.org/)6个PPI数据库,将潜在的药物作用靶点和已知的结肠癌相关靶点分别做蛋白质-蛋白质相互作用分析(Protein-Protein Interaction,PPI),构建相互作用网络,并筛选相互作用网络中具有显著意义的靶点,构成显著性相互作用网络。进一步运用Cytoscape软件的插件CytoNAC,计算显著性相互作用网络中每个节点的Degree centrality(DC)、Betweenness centrality(BC)、Closeness centrality(CC)、Eigenvector centrality(EC)、Network centrality(NC)、和Local average connec-tivity(LAC)六大拓扑参数,分析其在相互作用网络中的拓扑重要性。并将所有拓扑参数值大于平均值的靶点作为天佛参口服液抗结肠癌的潜在作用靶点;将筛选出的潜在作用靶点,运用Cytoscape软件的插件GlueGO,进行分子功能/生物学过程和信号通路的富集分析,进一步探讨天佛参口服液中的活性成分是通过影响结肠癌发生发展过程中的哪些关键环节,从而达到发挥抗结肠癌的效应;最后利用流式细胞术、Westerm blotting、免疫组织化学等分子生物学手段,对系统生物学分析的结果在实验水平进行初步验证,从而初步阐释天佛参口服液抗结直肠癌的作用机制。[结果]1)体外研究结果显示,天佛参口服液终浓度1.31mg/ml作用肿瘤细胞12h开始起效,在5.25mg/ml-84.00mg/ml之间对多种结肠癌细胞均有明显的抑制作用,且随着浓度的升高,抑制作用增强。在最大测试浓度84.00mg/ml时,所有受试肿瘤细胞的完整形态均发生改变,显微镜下观察到细胞碎片。天佛参口服液的作用时间为12、24、48h,随着作用时间的延长,IC50值呈降低趋势,提示作用时间愈长,对肿瘤细胞的抑制作用愈强。2)体内研究结果显示,天佛参口服液高剂量组(5.72g/kg)对HT-29人结肠癌细胞株直接接种的小鼠移植瘤模型的抑制率达到58.53%,进一步统计学比较显示,与模型组之间存在显著性差异(p0.01),提示了天佛参口服液具有良好的体内抗结肠癌效应。3)检索多个中药成分数据库,共收集了 541种化学成分。并运用ADME/Tox虚拟计算系统,以OB≥30%,DL≥0.18作为虚拟筛选条件,共筛选出100种潜在活性成分。通过文献比对挖掘,寻找出具有广泛药理活性、但生物利用度或类药性等方面不满足要求的活性成分共40种。最终,整合这两部分的筛选结果,共筛选出140种活性成分,即为天佛参口服液潜在的药效物质基础;运用药效团模型,并以SVM≥0.8,RF≥0.7为筛选条件,虚拟预测其潜在作用靶点,发现140种潜在活性成分中,有23种成分没有找到相应的靶点,其余1 17种活性成分共预测出531个潜在作用靶点;通过检索并整合多个疾病靶点数据库,收集与结肠癌发生、发展及治疗紧密相关的靶点,共挖掘出495个结肠癌相关靶点;将潜在的药物作用靶点和已知的结肠癌相关靶点分别做PPI,构建相互作用网络,并筛选相互作用网络中具有显著性意义的靶点,进一步运用Cytoscape软件的插件CytoNAC对显著性靶点相互作用网络进行网络拓扑学分析,结果显示:在显著性靶点相互作用网络中,DC、BC、CC、EC、NC 和 LAC 的平均值分别为 80、3389.987、0.474019、0.016892、20.66753和 14.94828,且满足 DC80、BC3389.987、CC0.474019、EC0.016892、NC20.66753和LAC14.94828条件的靶点共276个,即为天佛参口服液抗结肠癌的潜在作用靶点;将筛选出的276个潜在作用靶点,运用Cytoscape软件的插件GlueGO,进行分子功能/生物学过程和信号通路的富集分析,结果显示,这些靶点所涉及的分子功能/生物学过程主要包括:负性调节细胞因子分泌、调节有丝分裂过程中DNA损伤修复、调节有丝分裂细胞周期中G1/S期转换、调节周期素依赖性蛋白激酶活性、调节蛋白酪氨酸激酶活性、调节血管内皮生长因子受体活性、调节线粒体细胞色素C的释放、调节细胞程序性死亡等生物学过程;所涉及的信号通路主要包括:细胞周期信号通路、MAPK信号通络、IL-2信号通路、EGF/EGFR信号通络、细胞程序性死亡信号通路、细胞因子和炎症反应信号通路。流式细胞术、Westerm blotting、免疫组织化学等分子生物学手段验证结果显示天佛参口服液能不同程度地调控细胞周期、细胞程序性死亡、血管生成、炎症等结肠癌发生、发展过程中的关键生物学过程,从实验水平初步佐证了系统药理学的分析结果。[结论]天佛参口服液体外对多种结肠癌细胞的增殖有明显的抑制效应,且具有显著的时间依赖性;天佛参口服液体内也显示出显著的抗结肠癌作用。而其抗结肠癌机制可能是由于天佛参口服液中多种药效成分作用于各自的靶点,通过成分、靶点之间的协同整合模式,实现对细胞周期、细胞程序性死亡、血管生成、炎症等结肠癌发生、发展过程中关键性生物学过程的调控,最终达到抗结肠癌的效应。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前19条
1 吕高荣;;探讨用蒲地兰消炎口服液治疗小儿急性上呼吸道感染的临床效果[J];智慧健康;2020年02期
2 田学光;向雪姣;罗林云;盛雪燕;张泽国;;中药制剂扶正防感口服液的研究概述[J];中兽医医药杂志;2020年01期
3 李颖;;氨溴特罗口服液对小儿急性支气管炎治疗的临床研究[J];中国医药指南;2019年25期
4 马薇;杨丽;范学文;;豨红通络口服液治疗脑梗死的有效性评价[J];中西医结合心脑血管病杂志;2017年02期
5 黄俊华;程平;;蒲地蓝消炎口服液辅助治疗慢性盆腔炎57例[J];光明中医;2016年24期
6 冯金花;冯晓纯;;芩翘口服液联合注射用阿莫西林克拉维酸钾治疗小儿急性化脓性扁桃体炎疗效观察[J];中医临床研究;2017年06期
7 刘耿梅;;蒲地蓝消炎口服液治疗小儿急性上呼吸道感染的效果观察[J];中西医结合心血管病电子杂志;2016年35期
8 刘玮;;蒲地蓝消炎口服液治疗30例小儿上呼吸道感染疗效分析[J];世界最新医学信息文摘;2017年20期
9 曾远辉;;愈酚伪麻待因口服液治疗儿童咳嗽疗效与安全性观察[J];现代诊断与治疗;2017年08期
10 张学东;张宜欣;刘永红;王蓓;;反相高效液相色谱法测定蒲地蓝消炎口服液中绿原酸和咖啡酸的含量[J];中国卫生检验杂志;2016年05期
11 史耀勋;;馥感啉口服液佐治儿童原发性肾病综合征合并上呼吸道感染[J];实用临床医学;2016年05期
12 叶文婕;曹建峰;;珍视固本口服液防治糖尿病视网膜病变32例[J];北方药学;2015年08期
13 林艳;;蒲地蓝消炎口服液治疗小儿急性化脓性扁桃体炎的临床应用效果[J];家庭医药.就医选药;2017年10期
14 崔峰;;口服液瓶盖变身记[J];儿童与健康;2015年04期
15 隋娟;;蒲地蓝消炎口服液佐治咽结合膜热的疗效观察[J];浙江中医杂志;2014年02期
16 陈蓉;;蒲地蓝消炎口服液治疗小儿急性化脓性扁桃体炎的疗效分析[J];当代医学;2014年16期
17 李志武;张妍;顾国祥;;退热口服液治疗小儿急性上呼吸道感染风热证50例观察[J];实用中医药杂志;2014年10期
18 邱秀娟;;蒲地兰消炎口服液联合利巴韦林气雾剂治疗儿童急性上呼吸道感染疗效观察[J];中国社区医师;2013年23期
19 刘静;熊志勇;;蒲地蓝消炎口服液治疗30例小儿急性扁桃体炎的疗效观察[J];现代诊断与治疗;2013年20期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 薛峰;苏化平;;皮疾灵口服液的制备与治疗小儿手足口病疗效观察[A];中华中医药学会2013年药房管理分会学术年会论文汇编[C];2013年
2 李宝涛;;“前列王”口服液[A];中国中医药学会建会20周年学术年会专辑(下)[C];1999年
3 钟渠;周贤刚;郑桃晓;邹文蓉;张长富;;耳鸣消口服液治疗耳鸣临床研究[A];中华中医药学会耳鼻喉科分会第十六次全国学术交流会论文摘要[C];2010年
4 张黄兴;;1547蒲地兰消炎口服液治疗儿童化脓性中耳炎效果分析[A];中国中药杂志2015/专集:基层医疗机构从业人员科技论文写作培训会议论文集[C];2016年
5 刘英涛;;益健力口服液的制备方法探析[A];科技研究——2015科技产业发展与建设成就研讨会论文集(上)[C];2015年
6 张喜莲;;馥感啉口服液上市后临床再评价设计思考[A];中华中医药学会儿科分会第三十次学术大会论文汇编[C];2013年
7 吴利敏;杨季冬;杨琼;周尚;张敏;;近红外光谱快速分析法在小儿清热止咳口服液中的应用[A];全国生物医药色谱及相关技术学术交流会(2012)会议手册[C];2012年
8 蒋磊;孟祥松;李军;益磊;马欣羽;;蒲地蓝消炎口服液质量控制方法的研究[A];亳州市中药产业发展学术研讨会交流论文[C];2012年
9 李翔;刘皈阳;马建丽;周亮;高磊;;高效液相色谱法测定银栀口服液中栀子苷的含量[A];2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周论文集[C];2012年
10 刘光斌;谢六生;隆旭红;李怀彪;;大黄通气口服液的稳定性研究[A];甘肃省中医药学会2012年学术年会论文汇编[C];2012年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 顾鉴秋;肠清口服液对溃疡性结肠炎的防治作用及机制探讨[D];广州中医药大学;2014年
2 李灵娟;清瘟解毒口服液制备工艺的改进[D];南京农业大学;2015年
3 黄亮;甘苦口服液的研制及其抗肝纤维化药效学的实验研究[D];南方医科大学;2012年
4 戴启刚;金欣口服液对RSV诱导的TLR7信号转导通路的作用研究[D];南京中医药大学;2013年
5 陈争光;金欣口服液对RSV诱导的TLR3/RIG-I信号通路的调控作用的研究[D];南京中医药大学;2015年
6 薛忠文;参芍口服液对大鼠主动脉粥样硬化的疗效及其机制[D];河北医科大学;2013年
7 李佳曦;金欣口服液及白藜芦醇对RSV活化诱导的TLR3及其信号通路的调控作用[D];南京中医药大学;2012年
8 郭向飞;阿胶强骨口服液对去卵巢大鼠骨质疏松模型治疗作用的实验研究[D];华中科技大学;2009年
9 张锦;复方氯胺酮口服溶液剂的研制及其应用的研究[D];中国医科大学;2002年
10 王梅;健心力口服液治疗充血性心力衰竭的临床与实验研究[D];山东中医药大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙丽华;天佛参口服液抗结肠癌的药效学研究及作用机制探讨[D];南京中医药大学;2016年
2 陈荣华;黄藤素口服液的研制[D];湖南农业大学;2015年
3 梁启超;双奇口服液的研制[D];佳木斯大学;2009年
4 毕玉霞;参灵清瘟败毒口服液对鸡传染性支气管炎的疗效研究[D];吉林大学;2007年
5 车宇飞;林蛙油多肽口服液的免疫及毒理评价[D];吉林大学;2014年
6 闫婧姣;附姜口服液对小鼠免疫功能的影响及其急性毒性研究[D];河北农业大学;2015年
7 卢晓丽;松补力口服液质量提高研究[D];新疆医科大学;2014年
8 叶维民;草分枝杆菌口服液的研制及其对断奶仔猪的临床应用研究[D];湖南农业大学;2013年
9 裴昆;扶正祛浊口服液对慢性肾脏病3期患者的肾保护作用的临床评价研究[D];北京中医药大学;2013年
10 张媛媛;半夏口服液的制备及临床药理作用研究[D];青岛大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 玲;香茯益血口服液治疗癌症新成果[N];医药经济报;2002年
2 文广;香茯益血口服液[N];医药经济报;2002年
3 小芳;香茯益血口服液面市[N];医药经济报;2002年
4 赵靖;海福康口服液仍在进行非法宣传[N];中国消费者报;2008年
5 白河;消栓口服液[N];医药养生保健报;2006年
6 本报记者 殷俊;口服液装作“溶液”忽悠人[N];江苏科技报;2007年
7 记者 邱德生;口服液无证生产公开销售[N];中国食品报;2008年
8 刘健英;小建中口服液新用途[N];家庭医生报;2006年
9 白河;金莲花口服液[N];医药养生保健报;2005年
10 国讯;“长寿因子口服液”等未获批准[N];中国医药报;2010年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978