收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

桑叶防治糖尿病的效应成分群及其作用机制研究

季涛  
【摘要】:第一章文献研究第一节较系统地总结和归纳了国内外关于糖尿病发病机制、诊断方法和治疗方案等研究方面取得的进展,以期为糖尿病的深入认识以及临床治疗提供科学参考。第二节采用计算机对中医方剂数据库中关于治疗消渴症的方剂进行检索,应用Excel2010软件建立方剂数据库,收录每首组方中的单味药从而进行统计分析。采用关联规则方法对组方中药对以及药组的应用特点进行分析,从而探讨治疗消渴经方的用药规律与特点。第三节通过归纳与分析近年来国内外学者在糖尿病发病机制的认识、桑叶对其调节血糖的功效成分及其作用机制等方面取得的研究进展,以期为桑叶调控血糖及防治糖尿病并发症的作用机制深入研究提供指引,为桑叶资源的开发利用提供依据和参考。第二章桑叶多组分提取物的制备研究第一节干燥桑叶称重后,采用回流提取的方法,其工艺参数为:料液比1:40,溶剂为70%乙醇,提取时间45 mmin,提取2次,两次提取液过滤合并,减压浓缩至无醇味。选择AB-8型号的大孔树脂对粗提物进行纯化。桑叶提取物以2BV·h-1的流速上样,采用70%的乙醇以3 mL·min-1的流速进行洗脱,收集洗脱液,浓缩并冷冻干燥,进样分析。黄酮类成分含量为0.1%,酚酸类成分含量为0.4%,纯化后其含量分别为5.3%、10.8%。第二节干燥桑叶称重后,采用料液比1:12,回流1 h的提取方法进行提取,提取液采用80%醇沉24 h,上清液浓缩后在阳离子交换树脂上样,采用0.5mol·L-1的氨水以1.5 mL·min-1的流速进行洗脱,分别收集pH7-9.4, pH9.4-10.5, pH 10.5-13的不同pH段的洗脱液,浓缩,冷冻干燥得纯化的生物碱组分。DNJ主要集中在pH 7-9.4和pH 9.4-10.5两段,含量分别达到19.9%和39.4%。第三节干燥桑叶采用水提醇沉的方法对多糖类成分进行提取,得到桑叶粗多糖提取物。利用Sevage和AB-8大孔树脂纯化多糖,上柱溶液pH=8,用0.1 mg·mL-1的NaCl浓度以2mL·min-1的洗脱速度进行洗脱,收集洗脱液,冷冻干燥,得纯化的桑叶多糖组分。其中多糖含量由0.69%提高为18.9%。第三章采用葡萄糖氧化酶法,以蔗糖为底物,采用a-葡萄糖苷酶抑制模型对桑叶多组分进行评价;采用等效线法、周-特氏联合指数法和等辐射分析法评价两组分间的药效相互作用及量效特点,为揭示桑叶降血糖的作用机理提供科学依据。活性评价表明,桑叶黄酮、生物碱、多糖组分均具有显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其抑制率随各组分浓度的增加而升高,3个组分中桑叶生物碱抑制活性最强。桑叶生物碱与桑叶黄酮配伍、桑叶生物碱与桑叶多糖配伍均表现出协同增效作用,但桑叶多糖与桑叶黄酮组配伍未见明显的协同作用。第四章采用网络药理学方法对桑叶治疗糖尿病的8种活性成分的分子作用机制进行分析,揭示其多成分-多靶点-多通路的作用特点及相关关系。网络分析表明,桑叶中8种活性成分共涉及47个靶点,63条通路。这些通路与神经-内分泌-免疫等相关,其中包括与糖尿病关联的胰岛素、MAPK、VEGF、Wnt、Jak-STAT等多条信号通路。第五章采用雄性SD大鼠灌胃桑叶生物碱、黄酮提取物,在不同时间点采集血浆样品,处理后进行检测。结果表明,槲皮素和山柰酚灌胃0.333 h后达到峰值,说明大鼠口服桑叶黄酮组分后吸收和分布迅速。服药后4h左右,两者第二次达到峰浓度,说明其在肠道内的停留时间较长,可能原因为体内存在肝肠循环。DNJ和Fagomine在胃肠道能较快地吸收入血,血药浓度在0.667h达到峰值,说明两者进入大鼠体循环后快速分布,发挥药效迅速。第六章采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF/MS)技术结合多变量统计学分析,利用代谢组学的研究方法和技术探讨糖尿病模型小鼠血浆和尿液的整体代谢物谱特征、代谢轮廓变化和生物标志物群,并对桑叶生物碱、黄酮、多糖提取物干预后的生物效应转归与分子机制进行研究。结果表明,5组小鼠的血浆和尿液代谢物谱都得到了很好的区分,发现并鉴定了血浆中17个以及尿液中21个潜在生物标志物,血浆中生物标志物主要与缬氨酸,亮氨酸和异亮氨酸降解、色氨酸代谢和甘油磷脂代谢相关,尿液中生物标志物主要与苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸生物合成、苯丙氨酸代谢、烟碱和烟酸盐代谢、组氨酸代谢和鞘脂类代谢通路相关。这些代谢通路在糖尿病小鼠体内发生紊乱,而给予桑叶黄酮、多糖、生物碱组分后可使之逆转并向正常状态转归。第七章第一节采用肠道L细胞株GLUTag细胞为研究对象,研究AGEs对其细胞损伤、凋亡及炎症损伤的影响,在此基础上研究桑叶生物碱类、黄酮类、多糖类提取物以及单体DNJ和异槲皮苷干预后相应指标的变化,从而探讨其调节糖尿病的分子机制。结果显不,AGEs与RAGE结合后,可通过激活caspase-3、-9、诱导p53/Bax通路诱导肠道L细胞发生凋亡,同时激活NF-κB因子表达,释放TNF-a、IL-1、IL-6,从而使肠道L细胞产生炎症损伤。给予桑叶多组分后,各指标均向正常组回调,从而改善肠道L细胞炎症损伤,阻止细胞凋亡。第二节采用HepG2细胞为研究对象,优化胰岛素的作用浓度和作用时间,最终建立HepG2胰岛素抵抗细胞模型的最佳造模方法,在此基础上观察桑叶多组分对造模后的HepG2细胞葡萄糖吸收的影响。结果表明,胰岛素以3μg·mL-1作用48 h诱发的胰岛素抵抗效果最佳。桑叶生物碱、黄酮、多糖三个提取物和DNJ、异槲皮苷单体可以明显增加胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗,桑叶生物碱、黄酮、多糖三个提取物和DNJ、异槲皮苷单体处理后再用胰岛素造模与造模同时给药的HepG2细胞,葡萄糖吸收与正常水平没有显著差异,提示桑叶多组分可在糖尿病的发生发展过程发挥作用。第三节采用前脂肪细胞株3T3-L1为研究对象,观察高糖诱导后对细胞分化、葡萄糖摄取、脂肪细胞因子mRNA的表达的影响,在此基础上研究桑叶生物碱类、黄酮类、多糖类提取物以及单体DNJ和异槲皮苷干预后相应指标的变化,从而探讨其调节糖尿病糖脂代谢的分子机制。结果显示,桑叶生物碱、黄酮、多糖组分及DNJ、异槲皮苷单体在低浓度时可促进3T3-L1前脂肪细胞的增殖,同时均可促进脂肪细胞分化关键因子PPARγ、C/EBPα、 SREBP-1的表达,从而促进脂肪细胞的分化和葡萄糖摄取、转运,提高脂肪细胞胰岛素敏感性,继而改善胰岛素抵抗。第四节采用肾小管上皮细胞株HK-2为研究对象,观察高糖诱导后对其ROS、NADPH氧化酶、ERK1/2水平的影响,在此基础上研究桑叶生物碱类、黄酮类、多糖类提取物以及单体DNJ和异槲皮苷干预后相应指标的变化,从而探讨其调节糖尿病肾病的分子机制。结果显示,高糖可诱导HK-2细胞的可增加HK-2细胞中的NOX1、NOX2、NOX4的表达,诱导细胞EMT。给予桑叶多组分后,各指标均向正常组回归,表明桑叶多组分可通过调节NADPH氧化酶来减少ROS的产生,阻止HK-2细胞转分化。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 ;糖尿病[J];国外科技资料目录.医药卫生;1998年10期
2 ;糖尿病[J];国外科技资料目录.医药卫生;1998年01期
3 仝小林;;糖尿病9问(上)[J];药物与人;2007年03期
4 王秋月,刘国良;生活习惯与糖尿病[J];医师进修杂志;2000年09期
5 陈广耀;抗糖尿病中药开发前景展望[J];中国新药杂志;2000年07期
6 太田康晴,庄祥云;糖尿病[J];日本医学介绍;2000年08期
7 ;糖尿病[J];国外科技资料目录.医药卫生;2000年06期
8 ;糖尿病[J];国外科技资料目录.医药卫生;2000年08期
9 ;糖尿病[J];国外科技资料目录.医药卫生;2000年11期
10 林兰;倪青;董彦敏;;糖尿病中西医结合研究的思路与方法[J];医学研究通讯;2001年09期
11 ;糖尿病[J];国外科技资料目录.医药卫生;2001年11期
12 ;糖尿病[J];国外科技资料目录.医药卫生;2001年01期
13 ;糖尿病[J];国外科技资料目录(医药卫生);2002年12期
14 刘曦婷;糖尿病的中药治疗[J];天津药学;2002年05期
15 张人玲,关乐,孙素花,盛树力;糖尿病患者及糖尿病大鼠脑血流灌注的临床特点[J];中国医学影像技术;2002年01期
16 张立斌,刘志民,何金,张慧,石勇铨,刘会敏;褪黑素对糖尿病大鼠肾脏的保护作用[J];解放军医学杂志;2003年03期
17 栾健;血管内皮细胞生长因子与糖尿病[J];辽宁实用糖尿病杂志;2003年03期
18 杜丽 ,夏利利;治疗糖尿病并发症的药物进展[J];辽宁医学杂志;2003年03期
19 谢家政;糖尿病合并肺结核的临床分析[J];皖南医学院学报;2003年03期
20 青亩;;警惕“温柔杀手”——北京协和医院中医科副教授潘明政点评糖尿病[J];中国医药指南;2003年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吴东方;庄跃宏;陈秀芳;赵丽娜;杨晓东;唐茂林;;胰岛素依赖型糖尿病对大鼠随意皮瓣存活能力的影响[A];中国解剖学会2012年年会论文文摘汇编[C];2012年
2 崔瑾;韩姣姣;李凤翱;李凤翱;汤绍芳;刘萍;邱明才;张鹏;;1,25-二羟维生素D3对糖尿病大鼠肺脏病变的保护作用[A];中华医学会第十二次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2013年
3 郑滨珠;袁凤山;杨润桥;;自体干细胞激活疗法治疗糖尿病大鼠过程中血细胞及生化改变[A];中华医学会第十二次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2013年
4 刘铜华;吕仁和;高彦彬;;中医药防治糖尿病及并发症的作用途径[A];糖尿病(消渴病)中医诊治荟萃——全国第五次中医糖尿病学术大会论文集[C];1999年
5 石凤英;王尧;;灵芝对糖尿病大鼠肾脏形态学及微量白蛋白尿的作用[A];中国康复医学会第三次康复治疗学术大会论文汇编[C];2002年
6 陈名道;李荣英;邵莉;;糖尿病饮食治疗的若干进展[A];中国营养学会第九次全国营养学术会议论文摘要汇编[C];2004年
7 仝小林;李洪皎;;糖络并重治疗2型糖尿病[A];第九次全国中医糖尿病学术大会论文汇编[C];2006年
8 李筱荣;李艳;刘巨平;袁佳琴;;糖尿病大鼠血—视网膜屏障损伤的实验研究[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
9 杨毅;陈江华;王晶晶;秦岭;;雷帕霉素对糖尿病大鼠肾脏组织增殖和肥大的抑制作用[A];2007年浙沪两地肾脏病学术年会资料汇编[C];2007年
10 祁少海;刘坡;舒斌;谢举临;徐盈斌;黄勇;毛任翔;刘旭盛;;不同深度糖尿病大鼠烫伤模型的制备[A];第八届全国烧伤外科学年会论文汇编[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 冯伟伟;苹果酸铬对2型糖尿病大鼠的降血糖活性、作用机制及安全性初探[D];江苏大学;2015年
2 刘宇;糖尿病来源的骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死的相关研究[D];第四军医大学;2015年
3 李维辛;GLP-1受体激动剂治疗糖尿病的循证评价和对糖尿病大鼠胃动力影响的机制研究[D];兰州大学;2012年
4 田丽;糖尿病周围神经病运动纤维的早期评价[D];天津医科大学;2014年
5 柳忠豪;糖尿病对口腔种植体骨整合影响的作用机制研究[D];山东大学;2015年
6 李波;饱和富氢液对糖尿病神经病变的保护作用及机制研究[D];天津医科大学;2015年
7 米佳;Vaspin调控糖尿病炎症通路及苦酸通调法的干预机制研究[D];长春中医药大学;2015年
8 林宣佑;从SCAP/SREBP脂代谢信号转导途径探讨苦酸通调方调控2型糖尿病胰岛素抵抗的作用机制[D];长春中医药大学;2015年
9 齐月;木丹颗粒治疗痛性糖尿病周围神经病变的实验研究[D];辽宁中医药大学;2015年
10 王云;糖基化终末产物介导的平滑肌病变在糖尿病结肠动力障碍中的作用研究[D];南京医科大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 田宝明;低血糖指数挂面的研制及其对糖尿病大鼠糖脂代谢影响的研究[D];西南大学;2015年
2 黄琼;姜黄素对糖尿病大鼠肺组织损伤的保护作用及其可能机制[D];湖北科技学院;2015年
3 褚淑蕾;PI3k-Akt信号通路在2型糖尿病大鼠易发心房颤动中的介导作用[D];福建医科大学;2015年
4 石鹰;二膦酸盐对糖尿病大鼠下颌骨骨折愈合影响的实验研究[D];河北联合大学;2014年
5 郑嫦;CNP对Ach引起的糖尿病大鼠胃平滑肌收缩增强的影响及IGF-1的干预效应[D];延边大学;2015年
6 李宁;益气养阴活血方对糖尿病大鼠大血管NF-κB表达的影响[D];河北医科大学;2015年
7 王婉秋;辛伐他汀对2型糖尿病动脉硬化大鼠血浆VEGF、TGF-β1及CTRP3水平的影响研究[D];石河子大学;2015年
8 宋倩;2型糖尿病患者血清TLR-4水平与骨密度及影响因素关系研究[D];河北医科大学;2015年
9 王丽霞;TLR4及相关炎症因子在糖尿病大鼠心脏、肝脏和肾脏中的表达[D];河北医科大学;2015年
10 孙雪培;极长链脂肪酸与2型糖尿病大鼠脑Aβ生成的关系研究[D];河北医科大学;2015年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 郭赛珊 梁晓春 潘明政;中西医结合治疗糖尿病慢性并发症可显著改善症状[N];中国中医药报;2007年
2 本报记者 王乐羊;中西医结合防治糖尿病大有可为[N];中国中医药报;2002年
3 北京协和医院 梁晓春;对中医治糖尿病并发症研究的思考[N];中国中医药报;2011年
4 刘燕玲;肥胖是糖尿病的源头[N];健康报;2006年
5 仝小林;糖尿病慢性并发症论治[N];中国中医药报;2003年
6 汪敏;糖尿病皮肤易损元凶找到[N];卫生与生活报;2003年
7 林兰;中西医结合治疗糖尿病的前景[N];中国中医药报;2007年
8 北京协和医院中医科主任 梁晓春;糖尿病周围神经病变的中西医治疗进展[N];中国医药报;2009年
9 本报记者 刘艳芳;糖尿病干预不能忽视抗氧化[N];中国食品报;2012年
10 谭小月;糖尿病与肾病关系研究的新进展[N];中国中医药报;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978