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黄连素对小鼠异位内膜黏附种植的抑制作用及机制研究

陈惠娴  
【摘要】:目的:1、建立子宫内膜异位症小鼠模型,分别予以黄连素、米非司酮、生理盐水灌胃,观察灌胃后各组小鼠腹腔内的异位病灶数,明确黄连素能有效抑制异位内膜在小鼠腹腔内的黏附种植。2、检测小鼠腹腔液中IL-8的水平及异位病灶中细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule,ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein,MMP-9)的表达情况,初步探讨黄连素抑制异位内膜黏附种植的作用机制,为黄连素在临床治疗子宫内膜异位症中提供理论依据。方法:第一部分1、查阅国内外相关研究的最新进展。第二部分1、腹腔注射法建立子宫内膜异位症小鼠模型;2、将子宫内膜异位症模型小鼠随机分为黄连素1组、黄连素2组、黄连素3组、米非司酮组、模型组,每组10只小鼠;另设空白组,未行造模手术的小鼠5只。3、分组给药,每只小鼠每天灌胃1次,每次0.2ml,连续灌胃28天。(1)空白组、模型组:从造模后第1天开始予以生理盐水灌胃;(2)黄连素1、2、3组:根据前期实验中造模后异位内膜在小鼠腹腔内黏附种植的发展过程,分别从造模后第1天、造模后第8天、造模后第15天开始予以黄连素混悬液灌胃;(3)米非司酮组:从造模后第1天开始予以米非司酮混悬液灌胃。4、观察小鼠腹腔内异位病灶的生长情况。5、探讨黄连素对异位内膜黏附种植的抑制作用。第三部分1、ELISA法检测各组小鼠腹腔液中IL-8的水平。2、免疫组化法检测异位病灶中ICAM-1、VCAM-1、MMP-9的表达,IPP6.0分析各组免疫组化切片的平均光密度值(mean optical density,MOD)。结果:1、各组小鼠腹腔内均可见散在的异位病灶,病灶大小不一,为单个囊泡样或成串葡萄状,主要分布于肠系膜、大网膜、腹壁、肝下、脾下、子宫旁。子宫内膜异位症小鼠模型成功率为100%。2、显微镜下观察HE染色切片可见:各组小鼠异位病灶的组织形态及其结构相似。可见子宫内膜腺上皮及间质生长,腺体数量、形态不规则,呈柱状或矮柱状排列在囊泡的内腔面形成腺腔;间质薄厚不一,可有炎性细胞浸润。3、各组小鼠腹腔内异位病灶数的比较:(1)黄连素1组、黄连素2组、黄连素3组、米非司酮组小鼠腹腔内的异位病灶数较模型组明显减少,具有统计学意义(P0.05);表明黄连素能抑制异位内膜的黏附种植。(2)黄连素1组、黄连素2组、黄连素3组之间病灶数无明显差异(P0.05);表明黄连素在异位内膜黏附种植的不同时间段中均有抑制作用。4、各组小鼠腹腔液中IL-8水平的比较:(1)黄连素1组、黄连素2组、黄连素3组小鼠腹腔液中IL-8水平均明显低于模型组,具有统计学意义(P<0.05);表明黄连素能抑制腹腔液中IL-8的表达水平。(2)黄连素1组、黄连素2组、黄连素3组间的IL-8水平无明显差异(P0.05);表明黄连素在异位内膜黏附种植的不同时间段中,均能抑制腹腔液中IL-8的水平。5、ICAM-1、VCAM-1、MMP-9在各组小鼠异位病灶中的表达:在显微镜下观察免疫组化切片可见腺体及间质呈不均的棕黄色染色,表明ICAM-1、VCAM-1、MMP-9均存在于内膜的腺上皮及间质中。应用IPP6.0分析各组免疫组化的MOD值,进行半定量分析,结果显示:(1)黄连素1组、黄连素2组、黄连素3组、米非司酮组小鼠异位病灶中ICAM-1、MMP-9的MOD值均低于模型组,具有统计学意义,P0.05,表明黄连素在异位内膜黏附的早中晚不同时间均能抑制异位内膜中ICAM-1、MMP-9的表达。(2)黄连素1组异位病灶中VCAM-1的MOD值明显低于模型组,具有统计学意义(P<0.05),黄连素2、3组异位病灶中VCAM-1的MOD值与模型组无显著差异(P0.05),表明黄连素能在黏附早期抑制VCAM-1在异位内膜中的表达。结论:1、黄连素能抑制小鼠异位内膜在腹腔的黏附种植;2、在异位内膜黏附种植过程中,不同时间段的黄连素干预对异位内膜的抑制作用无明显差异。3、黄连素可能是通过抑制腹腔液中IL-8的水平及黏附分子ICAM-1、VCAM-1、MMP-9的表达,从而发挥对异位内膜黏附种植的抑制作用。


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