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基于p62-keap1/Nrf2通路研究六君子汤对氧化损伤ARPE-19细胞的保护作用机制

刘雨露  
【摘要】:目的:以氧化损伤ARPE-19细胞作为体外实验研究对象,观察六君子汤含药血清对氧化损伤细胞的保护作用;研究六君子汤对p62-keap1/Nrf2通路的调控作用,以阐明六君子汤保护氧化损伤细胞的机制。方法:用t-BHP(叔丁基过氧化氢)诱导ARPE-19细胞损伤。将ARPE-19细胞分成:正常对照组、模型对照组、空白血清组和六君子汤组(分为高、中、低三个剂量组)。采用MTT法和AnnexinV-FITC/PI法检测六君子汤含药血清对细胞存活率和凋亡率的影响;生化法检测SOD活性,DCFH-DA法检测细胞内ROS含量,western blot 检测 HO-1、NQO-1、p62、Nrf2、LC3Ⅱ蛋白表达。结果:1.相比于正常对照组,模型对照组细胞生存能力明显下降(p0.01);与模型组相比,三个剂量六君子汤干预组ARPE-19细胞存活率明显提高(p0.05)。2.相比于正常对照组,模型组的凋亡率显著增加;与模型组相比,三个剂量六君子汤干预组降低细胞的凋亡率。3.相比于正常对照组,模型组SOD活性下降,ROS含量增加(p0.05);与模型组相比,三个剂量六君子汤干预组可提高SOD活性,减少ROS含量(p0.05)。4.六君子汤含药血清可促进Nrf2核转位,上调HO-1和NQO-1蛋白表达;上调p62、LC3 Ⅱ表达;这些蛋白调控作用在Nrf2为靶基因的siRNA转染细胞作用不明显。结论:六君子汤可以保护由t-BHP诱导的ARPE-19细胞氧化损伤;作用机制是通过激活p62-keap1/Nrf2通路,上调Nrf2通路下游抗氧化酶表达和通过上调P62蛋白表达,激活自噬来实现。


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