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超细微雄黄颗粒的制备及其对肿瘤细胞作用的比较研究

詹秀琴  
【摘要】:三氧化二砷(As_2O_3)注射剂是目前临床治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的化疗常用药,实验发现其对凋亡基因bcl-2的表达有调控作用。雄黄是一种含砷的矿物中药,早在二十世纪七十年代,就已有人用雄黄来治疗癌症,但由于制剂粗糙,服用量大,疗效不理想,后来少有应用。我们受纳米化药物的启发,对雄黄的粗大颗粒进行改造,使之细微化,达到纳米、微米级,并对其药学性质作了研究,以期能使之运用于临床,成为口服的化疗药物。 我们采用传统的水飞法、气流粉碎法和微射流法分别制备出三种不同粒径的雄黄颗粒,对其粒径进行了测定,证实它们之间相差数十倍,并且用扫描电镜观察了它们的表面特征;用X射线衍射法测定了它们的峰谱,发现无论在外形还是在晶格上,它们之间均有差异。 我们以SMMC7721肝癌细胞为实验对象,用显微观察、四甲基氮唑盐(MTT)法、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪等方法研究了三种不同粒径的雄黄体外对肿瘤细胞增殖的影响。发现随着粒度的降低,雄黄作用后SMMC7721肝癌细胞的生长密度降低,细胞的凋亡程度提高,细胞外形变化加大,DNA琼脂糖凝胶电泳图谱拉长、DNA合成期细胞比率提高等特点,说明雄黄的粒度越小,对肿瘤细胞的抑制程度越大。 我们给小鼠灌服雄黄,在不同的时间点以原子荧光吸收法测定了小鼠血液中的砷浓度,发现随着雄黄粒度的降低,小鼠血液中的砷的最大浓度升高,药一时曲线下的面积加大,其它的药代动力学参数也发生了相应的变化。与此同时,用血清药理学的方法,我们还发现随着雄黄粒度的降低,含药血清对SMMC7721肝癌细胞的抑制程度也加强。 我们将Hep腹水瘤小鼠的腹水移植于ICR小鼠的皮下,使之在皮下形成瘤块,同时每日给移植小鼠灌服不同粒径的雄黄制剂,发现随着所灌服雄黄的粒 南京中医药大学博士论文 径降低,小鼠皮下瘤块的重量减小,肿瘤坏死面积比率提高,表明雄黄的粒径 越小,对皮下移植肿瘤的生长抑制作用越强。


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