RRM2 siRNA联合华蟾素对子宫内膜癌Ishikawa细胞的生长抑制作用

【摘要】： 研究目的:探讨RRM2siRNA联合华蟾素对子宫内膜癌Ishikawa细胞生长的影响。 研究方法:设计针对RRM2基因的小干扰RNA(SiRNA),采用阳离子脂质体Lipofectamine~(TM)M2000将SiRNA片段导入Ishikawa细胞中。将Ishikawa细胞分为空白对照组、N-siRNA转染组、siRNA转染组、siRNA转染+华蟾素组,用MTT法检测siRNA联合不同浓度华蟾素对细胞增殖的影响;将Ⅰshikawa细胞分为空白对照组、N-siRNA转染组、siRNA转染组、siRNA转染+2mg/ml华蟾素组,用流式细胞术检测细胞转染率、凋亡率及细胞周期分布情况;采用半定量RT-PCR和Westernblotting分别检测RRM2在mRNA和蛋白水平上表达的变化,用Transwell小室检测细胞体外侵袭能力。 研究结果:所设计的siRNA能有效地抑制Ⅰshikawa细胞的增殖,联合华蟾素后其抑制作用增强,但以2mg/ml浓度最佳:RRM2siRNA与华蟾素联合作用后,对凋亡的诱导也有增强作用,siRNA转染组、2mg/ml华蟾素及siRNA转染+2mg/ml华蟾素凋亡率分别为44.3%、42.0%、71.1%;与空白对照组比较,siRNA和华蟾素联合作用对细胞周期的影响表现为G_1期细胞显著增加,G_2和S期细胞比率明显减少;siRNA联合华蟾素还可显著下调RRM2在mRNA及蛋白水平上的表达,降低细胞侵袭力,而作为对照的错义序列N-siRNA转染组则没有上述效应。 结论:体外合成的siRNA联合2mg/ml华蟾素可显著降低Ⅰshikawa细胞中RRM2的表达,抑制细胞增殖,降低细胞侵袭能力,促进细胞凋亡并将细胞周期阻滞于G_1。