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丹仙片治疗乳腺增生病的实验研究

孙二虎  
【摘要】: 目的丹仙片是根据导师许芝银教授多年来治“癖”经验,遵循中医方剂组方原理,精选治疗“乳癖”药物,组方而成的治“癖”良方“丹仙汤”而来。该方疗效确切,应用多年,患者反应良好。本方由仙灵脾,丹皮,昆布三味药经先进的提取制备工艺加工而成。应用现代医学理论和实验方法,在制造乳腺增生病(HMG)大鼠模型的基础上,观察丹仙片对HMG大鼠在镇痛、性激素、体重、乳头直径、脏器系数、血流变、乳腺组织病理形态改变,以及对乳腺组织ER、PR、VEGF、Bcl-2、bax表达和细胞凋亡的影响和作用机制。并与乳癖消、他莫昔芬对比。目的是验证丹仙片治疗乳腺增生病的治疗效果并初步探讨该药治疗乳腺增生病的作用机理。 方法称取淫羊藿、牡丹皮、昆布各4kg。根据临床用药特点,牡丹皮经水蒸汽多次蒸馏,冷藏,抽滤,(?)提后得丹皮酚结晶。淫羊藿、昆布合并牡丹皮水蒸气蒸馏后的药渣水煎煮,合并3次水煎液,浓缩成稠膏,最后与丹皮酚结晶混合均匀制片。 实验选用昆明种雌性小鼠进行镇痛实验。扭体法:取小鼠40只,随机分为空白对照组、他莫昔芬组、和丹仙片大、小剂量组,盐酸曲马多组,灌胃给药:盐酸曲马多、他莫昔芬组小鼠换算为人的等效剂量,分别为1 mg/kg,0.1 mg/kg;丹仙片小剂量为5g/kg;丹仙片大剂量为20g/kg。灌胃给药,每次0.2ml,每日1次,连续3天,(空白对照组给于等量生理盐水),末次给药后40分后,分组给每只小鼠腹腔注入1.1%冰醋酸0.3ml,观察记录各组小鼠出现扭体的潜伏时间,及20分钟内小鼠扭体次数。热板法:取小鼠24只,随机分为空白对照组、丹仙片大、小剂量组,空白对照组用0.2ml生理盐水灌胃;丹仙片小剂量为5g/kg;丹仙片大剂量为20g/kg,0.2ml灌胃,测定各组30min,60min,90min,120min痛阈的变化及舔足次数。 实验采用苯甲酸雌二醇和黄体酮复制乳腺增生大鼠模型,给予大鼠后腿内侧肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5mg/kg/d,连续25天,继而肌注黄体酮4mg/kg/d,连续5天,制造乳腺增生病大鼠模型。同时随机分为空白对照组、单纯疾病模型组、他莫昔芬组、乳癖消组、和丹仙片大、小剂量组,分别给药干预。给药体积1ml/100g:乳癖消组依照0.5g/kg体重;他莫昔芬组:0.1 mg/kg体重;丹仙片小剂量组依照5g/kg体重;丹仙片大剂量依照20g/kg体重;正常对照组、模型组:给予等容量蒸馏水,每日给药1次。第5周禁食12小时后,毛细管眼眶取血后,脱颈椎处死大鼠,取脏器。 应用ELISA法检测血清E2、P、PRL;血液流变仪检测血液流变学变化;乳腺组织做常规HE染色;免疫组化检测乳腺组织ER、PR、VEGF、Bcl-2、bax表达和细胞凋亡的影响。 结果: 1.牡丹皮经水蒸汽多次蒸馏,冷藏,抽滤,(?)提,干燥后得到白色丹皮酚结晶42g;牡丹皮水蒸气蒸馏后的药渣水与淫羊藿、昆布煎煮,浓缩成深褐色稠浸膏加入丹皮酚结晶共约4.012L,折算生药含量3g/ml。 2.扭体法实验结果显示与空白对照组比较,丹仙片大、小剂量组减少冰醋酸所致小鼠20min内扭体次数,延长实验小鼠的疼痛潜伏时间,同他莫昔芬无统计学差异;在热板法实验中,与空白对照组比较,丹仙片大、小剂量组,均可使小鼠舔足痛阈提高,丹仙片大、小剂量组相比,存在一定剂量效应关系(P<0.05)。结果表明丹仙片有一定的镇定、止痛作用。 3.在减低造模大鼠乳头直径、重量方面,丹仙片大、小剂量组,优于乳癖消组(P<0.05),与三苯氧胺组无显著性差异(P>0.05),治疗后乳头直径与空白对照组比较无统计学差异(P>0.05);丹仙片对改善HMG大鼠的易激惹、急躁,好斗等症状具有相当明显的作用。血流变检查中,丹仙片大、小剂量组均可降低HMG大鼠血粘度(P<0.05),优于乳癖消组(P<0.05),大、小剂量组同他莫昔芬组无统计学差异(P>0.05),表明丹仙片可能是通过降低HMG大鼠血粘度,改善乳腺组织的微循环的。 4.ELISA法检测血清E2、P、PRL,实验表明:丹仙片大、小剂量均能降低大鼠血清E2、PRL含量(P<0.05),升高P的含量(P<0.01)。丹仙片大、小剂量组均能减少增生乳腺中ER、PR的表达(P<0.05),各组间无显著性差异(P>0.05)。 5.通过光镜对照观察,丹仙片治疗组较模型组、药物对照组乳腺组织增生性变化有明显改善,HMG大鼠乳腺组织腺泡数目减少,体积萎缩,腺泡腔减小;腺管扩张程度减轻,管腔内分泌物减少甚或消失,小剂量作用略好于乳癖消,大剂量接近他莫昔芬。效果提示丹仙片对乳腺组织的病理性损害有明显的抑制和缓解作用。 6.模型组大鼠Bcl-2出现阳性颗粒的细胞数高于正常组,丹仙片治疗组Bcl-2阳性率较模型组显著性下降,大剂量组明显,治疗后Bcl-2蛋白表达降低;Bax表达较模型组升高,大剂量组显著。各组间无显著性差异(P>0.05)。 7.模型组大鼠乳腺VEGF蛋白表达与正常组比较有极显著性差异(P<0.01);丹仙片大、小剂量组与模型组相比较均有显著性差异(P<0.05),丹仙片大剂量组明显优于乳癖消组与他莫昔芬无显著性差异,提示对丹仙片对大鼠乳腺组织中VEGF蛋白表达有一定的抑制作用。 8.为了保证临床用药安全,急性、毒性试验研究表明,丹仙片口服给药非常安全,毒性极低。 实验证明丹仙片治疗乳腺增生病其疗效从整体上优于乳癖消,在减低血粘度及降低Bcl-2的表达方面同他莫昔芬相当。实验证明丹仙片治疗乳腺增生病主要是通过减低血粘度,改善血液高凝状态,增加乳腺组织的血流灌注;调整诱发乳腺增生病发生的激素紊乱状态,抑制激素受体表达;降低腺体组织VEGF表达,抑制新生血管形成;调高乳腺组织中bax的表达,降低Bcl-2的表达,促进增生乳腺细胞的凋亡。证实丹仙片治疗乳腺增生是通过多方面、多层次、多环节来实现的。


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