威灵仙干预兔膝关节软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原、TGF-β1 mRNA表达的研究
【摘要】:
目的:
观察中药威灵仙对体外培养的兔膝关节软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原、TGF-β1 mRNA表达的影响,以探讨单味中药对软骨损伤的修复作用及可能机制。
方法:
无菌操作下获取新西兰白兔膝关节软骨,剪碎后,采用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶顺次消化法原代分离培养软骨细胞,倒置显微镜下观察原代培养的软骨细胞形态变化及甲苯胺蓝、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色方法鉴定;取处于对数生长期第3代细胞随机分为两组,实验组分别加入0.01、0.05、0.1、0.5、1.0 mg/ml的威灵仙培养基,对照组仅加入普通完全培养基进行培养,MTT比色法检测不同浓度的威灵仙对软骨细胞增殖的影响,免疫组织化学染色方法检测不同浓度的威灵仙对软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响,RT-PCR法检测威灵仙对软骨细胞TGF-β1 mRNA表达变化的影响。
结果:
①原代软骨细胞呈圆球形,悬浮状态,24h后大部分细胞贴壁,外观为多角形和不规则状;约10天后,软骨细胞增殖生长融合成片,外观呈典型“铺路石”状;传代后的软骨细胞生长速度加快,传4代后逐渐出现长梭形软骨细胞,传代培养至6代时,绝大部分细胞为长梭形呈成纤维细胞样外观,生长速度明显减慢,传代周期延长。软骨细胞经甲苯胺蓝染色后细胞外基质可见蓝色异染颗粒,细胞核染成深蓝色,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色可见软骨细胞胞浆棕黄色异染颗粒。②不同浓度的威灵仙均能促进软骨细胞增殖,尤以0.5mg/ml的威灵仙对软骨细胞的增殖效果明显,且增殖高峰出现在威灵仙干预后的第3天。③威灵仙干预后的软骨细胞均能阳性表达Ⅱ型胶原,其中0.1mg/ml、0.5mg/ml威灵仙组软骨细胞Ⅱ型胶原阳性表达的面积、吸光光度值、阳性表达率均优于其他组,与对照组相比有显著性差异(P0.05),其中0.5mg/ml威灵仙组在软骨细胞Ⅱ型胶原阳性表达面积方面有非常显著性差异(P0.01)。④0.05、0.1、0.5、1.0mg/ml威灵仙组均能促进软骨细胞TGF-β1 mRNA的表达,四组组间差异无显著性意义(P0.05),但作用的高峰为0.5mg/ml组。
结论:
威灵仙能够促进体外培养的兔膝关节软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原、TGF-β1 mRNA的表达,这可能是其修复软骨损伤的作用及可能机制之一。
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1 |
刘方军,曹谊林,刘伟,崔磊,夏万尧,钟斌,刘德莉,吴娟娟;基因转染技术提高体内构建组织工程化软骨质量的实验研究[J];中国临床康复;2003年06期 |
2 |
亓建洪
,赵庆华
,刘延菊
,李亚鲁;白细胞介素-1β对人软骨细胞基质金属蛋白酶-13 mRNA表达的作用[J];中华风湿病学杂志;2005年03期 |
3 |
李丹,范哲,李广生;Runx2与骨生长发育[J];中国地方病学杂志;2004年06期 |
4 |
刘利锋;IGF对软骨作用的研究进展[J];中国美容医学;2004年02期 |
5 |
翟木绪,廖二元,彭依群;结缔组织生长因子与软骨细胞及成骨细胞的增殖分化[J];国外医学.内分泌学分册;2004年04期 |
6 |
万荣,杨庆铭,邓廉夫,张玥;不同浓度雌激素对软骨细胞金属蛋白酶mRNA表达的影响[J];中华风湿病学杂志;2002年03期 |
7 |
万荣,杨庆铭,邓廉夫,张玥;雌激素对软骨细胞胶原表型表达的影响[J];中国运动医学杂志;2005年02期 |
8 |
舒朝锋,崔磊,刘伟,曹谊林;人骨髓间充质干细胞向软骨细胞诱导分化的实验研究[J];中华创伤骨科杂志;2004年02期 |
9 |
张旻,王美青,王景杰;压力对髁突软骨细胞超微结构及可聚蛋白多糖分泌的影响[J];医用生物力学;2004年02期 |
10 |
邵乐南,程鹏,马绪臣,陈卫民;雌二醇对兔髁突软骨细胞增殖与分化的影响[J];同济医科大学学报;2000年06期 |
11 |
何清义,李起鸿,许建中;两种诱导方法对去分化软骨细胞II型胶原的诱导[J];中国矫形外科杂志;2004年Z4期 |
12 |
肖进;徐心侨;刘登峰;詹静;谷志远;;兔颞下颌关节盘前移位后髁突软骨细胞Fas及Caspase-8表达研究[J];口腔医学研究;2008年02期 |
13 |
周国顺;李雄峰;管国华;蒋雪生;黄胜;陈成冬;;兔软骨细胞的高密度培养及生物学特征[J];浙江医学;2008年07期 |
14 |
李景学
,蔡跃增;自我测验[J];国外医学.临床放射学分册;1986年05期 |
15 |
张春雷
,王金华
,孙美乐
,石玉霞
,姚洪菊;锌对软骨细胞保护作用的电镜观察[J];哈尔滨医科大学学报;1989年S1期 |
16 |
张春雷,孙美乐,姚洪菊;抗氧化剂和透明质酸对软骨细胞的保护作用[J];中国地方病学杂志;1992年06期 |
17 |
李宏强,许善锦,常淑云,王夔;活性氧和黄腐酸使软骨细胞分泌蛋白多糖异常[J];科学通报;1994年04期 |
18 |
姚向前,马绪臣,张震康;兔下颌骨髁状突软骨细胞的分离、培养和鉴定[J];北京医科大学学报;1996年06期 |
19 |
王松艳!儿科学院儿保科;长骨干骺端生长板发育的调控[J];重庆医科大学学报;1999年04期 |
20 |
傅捷,吴海山,周维江,祝云利,董肇阳;软骨细胞纤维蛋白胶混合物修复兔关节软骨缺损的实验研究[J];第二军医大学学报;2000年07期 |
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