收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

纳米羟基磷灰石的制备及其用于细胞中过氧化氢的测定

李春云  
【摘要】:细胞在代谢过程中不断产生各种活性氧(reactive oxygen species, ROS),如超氧阴离子自由基(O2-)、羟基自由基(·OH)、脂自由基(ROO-)、过氧化氢(H202)等,其中H202是最为稳定的一种ROS。研究发现过氧化氢在细胞代谢过程中扮演着重要的调节作用,它可与细胞内的生物大分子反应,引起细胞膜脂质过氧化、细胞内蛋白质和酶变性、DNA损伤等,最终导致细胞死亡、组织损伤、心血管疾病、肿瘤及神经元退变等多种疾病的发生。因此建立一种简单快速的方法用于H202浓度的检测,对临床疾病的预防、诊断和监控具有重要意义。本论文研究了纳采羟基磷灰石、辣根过氧化物酶-纳米羟基磷灰石(HRP-HAP)复合物的制备并将其用于细胞中H202的测定。主要内容如下: 1.纳米羟基磷灰石(HAP)的制备及表征。以Ca(OH)2和H3PO4原料,用共沉淀方法制备了纳米羟基磷灰石;采用X射线衍射(XRD)、透射电子显微镜(TEM)、扫描电子显微镜(SEM)、红外光谱(FTIR)等方法对其进行了表征。XRD结果表明制备的HAP为六方晶型;TEM表明制备的HAP为针状结构,长约为160-180 nm,宽约为20-25 nm,并且晶粒分散较好,没有严重的团聚现象;SEM表明HAP具有良好的三维孔状结构。 2.辣根过氧化物酶(HRP)在纳米羟基磷灰石(HAP)表面的固定、直接电化学及对H202还原的电催化作用。将HRP分子修饰到HAP表面制备了HRP-HAP复合物,采用红外光谱(FTIR),紫外光谱(UV-vis)及电化学方法(CV)对其进行了表征,结果表明HRP成功地吸附在HAP表面。将HRP-HAP修饰到GC电极表面制备了HRP-HAP/GC电极,用伏安法研究了HRP-HAP/GC电极的电化学性质。结果显示,HRP固定在HAP表面后能够进行有效的直接电子转移,其循环伏安曲线上不仅表现出一对良好的、几乎对称的氧化还原峰,氧化、还原峰电位分别为-338 mV和-401mV(vs.SCE),式量电位E0'为-370 mV,且几乎不随扫速的变化而变化,表观电子传递速率常数ks为3.77±0.78 s-,说明HAP纳米材料能够提供一个很好的微环境以加速HRP的电子转移。用伏安法和计时电流法研究了HRP-HAP/GC电极对H202还原的电催化作用。结果表明,在电位为-400 mV时,HRP-HAP/GC电极对H202具有最佳的响应,响应时间约为2s,催化电流与H2O2浓度在5μmol/L~0.82 mmol/L的范围内呈线性相关(相关系数为0.998),最低检测限达到了0.1μmol/L。此外,该电极还可用于实际样品中过氧化氢的检测。 3.辣根过氧化物酶-纳米羟基磷灰石(HRP-HAP)修饰电极用于RAW264.7小鼠巨噬细胞中H202的检测。用伏安法研究了HRP-HAP/GC电极对RAW264.7细胞中H202的测定,根据响应电流与浓度的关系曲线得出细胞内H202浓度约为8 nmol/L。同时,用该电极研究了N-甲酰-L-甲硫氨酰-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸三肽(fMLP)对RAW264.7细胞H202释放的刺激作用,结果表明,在加入fMLP (0.3μmol/L)后,随着时间的延长,细胞中H202释放量逐渐增大,在30 min时达到了最大值(约为17nmol/L),之后浓度逐渐降低。表明该方法可用于细胞内H202释放的动力学过程研究。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 严芳,刘宝红,邓家祺;二氧化硅固定辣根过氧化物酶过氧化氢生物传感器[J];分析化学;1997年11期
2 缪慧,尹立志,张国蓉,邢克礼;过氧化氢生物传感器的研制[J];分析化学;1995年06期
3 展海军;马超越;白静;;固定化辣根过氧化物酶生物传感器测定火腿肠中亚硝酸盐[J];食品研究与开发;2011年02期
4 王怀生;潘芊秀;王桂香;;壳聚糖/聚乙烯吡咯烷酮固定辣根过氧化物酶的过氧化氢生物传感器[J];分析化学;2005年11期
5 傅小红;;聚靛蓝胭脂红固定过氧化物酶生物传感器的研究[J];宜宾学院学报;2007年06期
6 张国荣;;以浸蜡石墨电极为基体的过氧化物酶生物传感器[J];化学传感器;2001年01期
7 谭辉玲,陈胜洲,魏泽英;辣根过氧化物酶脂膜生物传感器的研究[J];传感器技术;1993年02期
8 邓家祺,王氢;生物电极的最新发展[J];分析科学学报;1994年03期
9 马美萍;连国军;曹建明;;辣根过氧化物酶/多壁碳纳米管修饰铂电极生物传感器用于过氧化氢的循环伏安测定[J];理化检验(化学分册);2011年03期
10 方金洋;;纳米羟基磷灰石对幼年骨生长的影响[J];江西医药;2018年08期
11 杨薇;王健平;刘鑫喆;黄歆博;李雪;;氟纳米羟基磷灰石对早期根面龋再矿化效果的实验研究[J];口腔医学研究;2017年02期
12 ;纳米羟基磷灰石合成技术[J];乙醛醋酸化工;2016年08期
13 陈向深;;纳米羟基磷灰石及其复合材料对牙周膜细胞的影响[J];现代诊断与治疗;2016年14期
14 程光存;严中亚;李春生;严宇;韦晓勇;;纳米羟基磷灰石对人脐带静脉血管内皮细胞的毒性评价[J];中国组织工程研究;2015年16期
15 年利伟;赵建民;刘瑞;;纳米羟基磷灰石复合人工骨的研究进展[J];内蒙古医科大学学报;2015年03期
16 任夏敏;范德增;;纳米羟基磷灰石的制备及在口腔领域中的应用[J];北京口腔医学;2013年03期
17 蒋斌;杨锋;刘志坤;;碱性成纤维细胞生长因子复合纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合物修复兔桡骨缺损[J];中国组织工程研究;2012年34期
18 孙伟张;周克;周毛仔;郭正奎;;正电子显像剂~(18)F纳米羟基磷灰石制备[J];西南国防医药;2011年06期
19 魏俊超;周杨;崔毅;陈义旺;章培标;陈学思;;纳米羟基磷灰石表面改性研究现状[J];高分子材料科学与工程;2011年11期
20 王云;王青山;;纳米羟基磷灰石及其复合材料在口腔医学中的应用[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张名均;冯铃;;纳米细菌和纳米羟基磷灰石的研究比较[A];第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编[C];2016年
2 蒋斌;杨锋;刘志坤;;碱性成纤维细胞生长因子复合纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合物修复兔桡骨缺损[A];2015年中国中西医结合医学美容学术会议、中国中西医结合学会医学美容专业委员会暨第三届中国中西医结合抗衰老微创技术研讨会、第四届全国乳房与形体整形美容高峰论坛、第十七届海峡两岸微整形学术研讨会论文集[C];2015年
3 汤京龙;王硕;王建宇;刘丽;李佳戈;苑富强;奚廷斐;;骨内注射后纳米羟基磷灰石颗粒在小鼠体内分布特性的初步研究[A];中国环境诱变剂学会第14届学术交流会议论文集[C];2009年
4 孙建英;王德平;黄文旵;;纳米羟基磷灰石对溶菌酶的吸附和解析性能研究[A];2009年上海市医用生物材料研讨会论文汇编[C];2009年
5 李波;周满;彭汝忠;曾金;马勇;廖晓玲;;纳米羟基磷灰石粉体制备工艺及影响因素研究进展[A];2011中国功能材料科技与产业高层论坛论文集(第二卷)[C];2011年
6 阮承祥;陈运法;谢裕生;;机械置换法在纳米羟基磷灰石制备中的应用[A];纳微粉体制备与应用进展——2002年纳微粉体制备与技术应用研讨会论文集[C];2002年
7 杨凤;施利毅;张剑平;;纳米羟基磷灰石的制备及其吸附性能的研究[A];第三届功能性纺织品及纳米技术应用研讨会论文集[C];2003年
8 徐征丽;孙皎;;不同浓度的纳米羟基磷灰石颗粒对大鼠成骨细胞的作用研究[A];2008年上海市医用生物材料研讨会论文汇编[C];2008年
9 周筠;张俊;王德平;黄文旵;姚爱华;;纳米羟基磷灰石的制备及其对溶菌酶吸附性能的研究[A];2008年上海市医用生物材料研讨会论文汇编[C];2008年
10 张雪梅;;纳米羟基磷灰石前体与胶原自组装成类骨质复合材料的实验研究[A];中华口腔医学会全科口腔医学专业委员会第一次学术年会会议论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 任凯;海藻酸/肽基纤维/纳米羟基磷灰石可注射骨修复材料的制备及性能研究[D];安徽医科大学;2017年
2 陈菲;纳米羟基磷灰石生物材料的制备及性能研究[D];厦门大学;2004年
3 孟纯阳;纳米羟基磷灰石/聚酰胺66的生物学性能及修复骨缺损的实验研究[D];重庆医科大学;2005年
4 刘丽萍;纳米羟基磷灰石对聚焦超声切除组织效率的影响研究[D];重庆医科大学;2005年
5 曹献英;纳米羟基磷灰石诱导肝癌细胞死亡的作用靶点及机理研究[D];武汉理工大学;2005年
6 张利;纳米羟基磷灰石与壳聚糖复合硬组织修复材料研究[D];四川大学;2005年
7 林晓艳;高强度纳米羟基磷灰石/胶原仿骨材料研究[D];四川大学;2005年
8 张翔;纳米羟基磷灰石增强聚酰胺66骨修复复合材料的结构和性能研究[D];四川大学;2006年
9 葛亮;可注射式硫酸钙/纳米羟基磷灰石人工骨的研制及其生物学性能的初步研究[D];第二军医大学;2007年
10 向鸿照;纳米羟基磷灰石/聚酰胺/壳聚糖复合骨修复材料研究[D];四川大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李春云;纳米羟基磷灰石的制备及其用于细胞中过氧化氢的测定[D];南京师范大学;2011年
2 马超越;固定化辣根过氧化物酶生物传感器制作及应用研究[D];河南工业大学;2011年
3 胡茜茜;胶原基复合模板调控矿化纳米羟基磷灰石形貌的研究及其生物学评价[D];华中科技大学;2017年
4 陈培峰;纳米羟基磷灰石/聚己内酯复合纤维的制备及表征[D];东华大学;2018年
5 代耀;碳纳米管和纳米羟基磷灰石增强聚己内酯骨支架的性能研究[D];南昌大学;2018年
6 龚伟;纳米羟基磷灰石在古象牙修复及QCM-D芯片中的应用研究[D];西南交通大学;2018年
7 李艳群;纳米羟基磷灰石/聚(DTH)碳酸酯复合材料的制备与表征[D];河南理工大学;2017年
8 李全;新型纳米羟基磷灰石/聚乳酸多孔复合材料的制备研究[D];天津工业大学;2018年
9 樊晓韩;纳米羟基磷灰石/聚酰胺66仿生骨在颈前路减压融合术中治疗脊髓型颈椎病的远期疗效[D];郑州大学;2018年
10 李云飞;银锶掺杂纳米羟基磷灰石的合成及骨修复基础研究[D];河北大学;2017年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 马维维;新型生物传感器使急性心梗确诊率更高[N];科技日报;2018年
2 新华社记者 刘曲;新型生物传感器有助提高诊断效率[N];健康报;2018年
3 本报记者 王延斌;生物传感器多学科“舰队”启航[N];科技日报;2018年
4 记者 杨德林 邓静 通讯员 崔茜;我市攻克石墨烯生物传感器世界难题[N];德州日报;2017年
5 本报记者 孙明河 通讯员 李良;生物传感器:协同创新迫在眉睫[N];科技日报;2015年
6 张巍巍;美制成新型生物传感器[N];科技日报;2012年
7 张巍巍;美研制出超灵敏生物传感器[N];科技日报;2012年
8 记者 白毅;单核苷酸多态性检测生物传感器开发成功[N];中国医药报;2012年
9 本报记者 解悦;“纳米医生”进入人体探病治病[N];南京日报;2009年
10 白毅 王宇星;我国生物传感器研究获重大进展[N];中国医药报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978