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石榴叶多酚对酒精性肝损伤的保护作用研究

邢佳  
【摘要】:石榴(Punica granatum L.)又名安石榴、金庞、天浆、丹若等,属于石榴科石榴属植物,在我国分布十分广泛,是一种非常丰富的植物资源。现代研究显示:石榴叶含有多酚、多糖、黄酮类等多种有效成分,赋予了石榴叶具有抗氧化、抗菌、抗病毒、收敛止泻、降低血脂等多种生理功效。因此,本试验拟从石榴叶中提取出多酚,并从抗氧化角度、生化角度、肝组织的病理分析及超微结构观察这四个方面探讨石榴叶多酚对酒精性肝损伤的保护作用。1.石榴叶多酚的提取及组分验证。采用单因素结合响应面试验,考察了液料比、提取温度、提取时间、pH对石榴叶多酚的提取效果,得到提取石榴叶粗多酚(CPPL)的最佳工艺条件,然后采用大孔树脂法对CPPL进行分离、纯化,得到石榴叶多酚1(PPPL1),进一步用聚酰胺层析柱对PPPL1进行分离,得到了纯度更高的石榴叶多酚2(PPPL2)。结果显示,CPPL的最佳工艺条件:液料比为20:1,提取温度为60℃,提取时间为1.5h,CPPL的含量为265.35mg/g; CPPL的纯化结果显示:最适宜纯化CPPL的大孔树脂为AB-8,静态吸附条件:上样浓度为2.5mg/mL,pH为4,上样速率为2mL/min,解吸条件为:乙醇体积分数为60%,得到的PPPL1纯度为62.44%,PPPL2的纯度为92.83%;高效液相色谱技术验证了PPPL2中含有没食子酸及鞣花酸等多酚类物质。2.从抗氧化角度探讨石榴叶多酚对酒精性肝损伤的改善作用,研究了石榴叶多酚清除自由基及提高体内抗氧化的能力。首先分别测定了CPPL、PPPL1、PPPL2对超氧自由基、羟自由基、亚硝酸盐的清除作用及还原力。结果表明:CPPL、PPPL1、 PPPL2均具有较好的还原力、抑制亚硝酸盐的能力以及清除超氧自由基、羟自由基的功效,其抗氧化效果:PPPL2PPPL1CPPL。然后通过建立小鼠急性肝损伤模型,研究PPPL2对小鼠急性酒精性肝损伤的改善作用。60只小鼠被随机分为空白对照组、模型对照组、PPPL2低、中、高各剂量组((100、200、400)mg/kg·bw))、阳性对照组(bifendate,150 mg/kg·bw),每组10只,连续灌胃30天,第31天除空白对照组外,其余各组小鼠均灌以50%乙醇,建立小鼠急性肝损伤模型,12h后,分别取小鼠眼球血并分离血清,脱臼处死,取肝脏。结果表明:模型组小鼠肝脏及血清中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活力及谷胱甘肽(GSH)含量较空白对照组显著下降,丙二醛(MDA)含量则显著升高,而PPPL2各剂量组却随着PPPL2剂量的增多逐渐提高小鼠肝脏及血清中CAT、SOD、GSH-Px活力及GSH含量,降低MDA含量,抑制脂质过氧化作用,其中高剂量组某些指标的改善程度甚至已经达到了阳性对照组水平。提示,石榴叶多酚不仅具有较好的体外抗氧化能力,还可通过增强机体的抗氧化酶活性,提高机体的抗氧化能力,改善因酒精引起的体内抗氧化酶活性的降低,从而对酒精性肝损伤起到一定的保护作用。3.通过建立小鼠急性酒精性肝损伤模型,研究PPPL2对小鼠甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平的调节作用及对小鼠酒精性肝损伤的改善作用。造模后结果表明,模型组小鼠肝脏ALT、AST水平及血清中ALT、AST和TG水平均显著升高,PPPL2各剂量组可不同程度改善因酒精所致肝脏及血清中ALI、AST、TG水平的升高,其中高剂量组对肝脏ALT及血清TG、AST、ALT的调节作用达到了阳性对照组水平;小鼠病理切片显示:模型组小鼠肝细胞成片坏死、肝细胞炎症浸润严重、肝索排列紊乱,而PPPL2各剂量组随着剂量的增加可逐渐改善因酒精而引起的肝细胞炎症反应、脂肪变性、肝索紊乱等病症,其中高剂量组的改善程度最为明显;小鼠超微结构显示:模型组小鼠肝细胞内出现大量脂滴,核膜皱缩剧烈,染色质分布异常,线粒体嵴模糊不清,粗面内质网扩张现象严重,核糖体颗粒脱落,而PPPL2各剂量组随着多酚剂量的增多可逐渐改善因酒精而引起的小鼠肝组织内脂滴聚积,核膜皱缩,线粒体畸形,内质网肿胀等病症,其中高剂量组对小鼠酒精性肝损伤的改善程度与阳性对照组相当。说明,PPPL2对酒精性肝损伤具有一定的保护作用。


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