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百里香酚抑制秀丽线虫体内白色念珠菌毒性及其抗菌机制研究

束成杰  
【摘要】:百里香酚作为疏水性酚类化合物,具有体外杀菌作用。百里香酚可经百里香油通过分子蒸馏技术纯化而得。实验探究出纯化百里香油的工艺条件:蒸馏器系统压力为150Pa,刮膜转速为300 r/min,蒸发器表面温度为45℃,进样速度为1.0 mL/min,将一次蒸馏轻组分进行二次蒸馏,所得重组分并入一次蒸馏重组分中再次蒸馏,所得总重组分经丙酮、无水乙醇先后重结晶,得到纯度大于98%的百里香酚。本研究中,体外实验数据表明,百里香酚在白色念珠菌不同的发育时期呈浓度相关性地抑制白色念珠菌生长、被膜形成以及菌丝生长。由于免疫缺陷的病人数目增加,真菌感染已成为世界性难题。真菌感染是导致临床发病率和致死率的重要原因。白色念珠菌,被认为是最常见的致病真菌。秀丽线虫作为经典的模式动物,由于结构简单,遗传背景研究清楚,在评价植物天然产物体活性、筛药等方面得到应用。本研究探究百里香酚体内抑制白色念珠菌作用,建立了白色念珠菌感染线虫的模型,用百里香酚处理这一模型,探究百里香酚对线虫白色念珠菌的抑制作用。体内抑菌实验结果表明百里香酚能够延长受白色念珠菌感染的线虫寿命,抑制线虫肠道白色念珠菌单克隆数目,提高受白色念珠菌感染的线虫抗菌基因的表达水平。此外,本研究揭示了线虫体内百里香酚抑制白色念珠菌的免疫机制。百里香酚能够恢复受白色念珠菌感染以后p38 MAPK信号通路的pmk-1、sek-1两基因的正常表达,降低白色念珠菌对秀丽隐杆线虫的毒性影响,维持线虫的固有免疫。此外,Western blot实验结果表明,白色念珠菌显著性地降低pmk-1基因的磷酸化水平,但百里香酚处理受白色念珠菌感染的线虫可以显著性地恢复pmk-1磷酸化水平。因此,百里香酚至少部分通过p38 MAPK信号通路抵御白色念珠菌的侵染,维持线虫固有免疫。所有实验数据表明,p38 MAPK信号通路在百里香酚调控受白色念珠菌感染的线虫这一过程中扮演重要角色。


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