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毛冠鹿性连锁基因的克隆与性染色体鉴定研究

蒋华云  
【摘要】:毛冠鹿存在种内核型多态,目前已发现六种核型:1983年张锡然等报道了两种(2n=48,♂和2n=47,♀),并建立其细胞株。此后,王宗仁、施立明等报道另外两种核型(2n=46,♀,1984;2n=47,♂,1991)。本实验室近年又发现两种新核型(2n=48,♀,1998:2n=48,♂,2002)。仔细观察和分析发现这种多态主要表现在染色体形态、数目以及染色体长度的多态,变化主要集中在异染色质丰富的几条染色体上,而这几条染色体正是核型中不配对的异型染色体。 根据人和鼠性别分化相关的ZFY、ZFX基因序列设计引物,以雌雄毛冠鹿的基因组DNA为模板进行PCR扩增,将扩增产物克隆到pMD18T上,获得ZFY、ZFX重组克隆,并测定了ZFY、ZFX基因片段的序列,序列比较显示两者同源性达91%,仅在少数位点有差异,以此确定AvaⅡ为ZFX上特异酶切位点,通过PCR扩增和AvaⅡ特异酶切对毛冠鹿性别进行鉴定。 通过基因克隆、染色体显微切割、DOP-PCR以及荧光原位杂交(FISH)等技术,首先获得了一些与毛冠鹿性别和性染色体相关的基因,如ZFX/ZFY基因、SRY基因、G6PD基因、DYZ重复序列等,进而在显微切割的单条染色体上扩增这些基因,从而推断核型Ⅵ(2n=48,♂)中的一对异型染色体一条为X染色体,一条为Y染色体;核型Ⅴ(2n=48,♀)中的一对大的端着丝粒染色体为X染色体。分别用人X、Y染色体特异的整条染色体涂染探针,通过荧光原位杂交的方法,检测核型Ⅰ中是否存在与人X、Y染色体同源的片段,结果显示该毛冠鹿间期、中期细胞都呈阴性,提示可能毛冠鹿与人的亲缘关系较远。


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