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稻褐飞虱不同生物型的荧光差异显示

乌慧玲  
【摘要】:褐飞虱[Nilavarpata lugens(St(?)l)]是整个亚洲稻区的首要害虫。对于该虫的发生发展规律及其综合防治措施等国内外都进行了广泛的研究,并已取得了长足的进展。为了进一步探讨褐飞虱生物型问题的本质,本课题在前人研究的基础上,利用荧光差异显示的方法对稻褐飞虱两种生物型进行了系统的研究,取得了下列几个方面的主要结果和结论: 1)对单对接种纯化的实验材料用苗期群体鉴定的方法进行了稻褐飞虱生物型的鉴定。 2)通过反复的试验摸索,我们找到了一条用氯仿多次抽提、离心去除固体杂质和色素的有效方法,获得的RNA纯度较高,完全符合建cDNA文库的要求。这不仅为褐飞虱的分子生物学研究创造了有利条件,亦可为其它小型昆虫的同类研究提供借鉴作用。 3)用三种锚定荧光引物FHT_(11)—A、FHT_(11)—C和FHT_(11)—G以及所选取的8种随机引物对稻褐飞虱两种生物型进行了荧光差显实验,从实验中我们得到了近40条的差异的条带,说明稻褐飞虱不同生物型之间在mRNA水平上确实存在着本质的差别。 4)对差异的条带进行了克隆测序,克隆到了487bp的g12-1和314bp的37-2两个DNA片段,前者为褐飞虱生物型Ⅱ所特有;后者为褐飞虱生物型Ⅰ所特有。从而表明,褐飞虱不同生物型间不只是在致害表型和遗传背景上存在显著差异,而且在基因表达水平上亦存在显著差异。我们得到了两条差异明显的条带序列,Blast序列比对没有同源序列。 5)构建了稻褐飞虱两种生物型的cDNA文库,并且两种文库的滴度都达到10~6,为进一步研究稻褐飞虱生物型的本质打下基础。 6)对果蝇的p53基因进行了克隆测序,并且与部分其他物种的p53进行了进化分析。为p53的研究打下基础。


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