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新杀虫微生物资源筛选利用研究

陈志芳  
【摘要】:微生物杀虫剂作为生物杀虫剂资源中的一种,具有其自身的一些特点:具有强致病力;具有迅速的杀虫效果和传播感染的能力;残效期长,使用后在较长时间内保持杀虫活力;成本低,对人畜安全及有益动物安全,对植物不产生药害等等。这些自身特性都表明开发新型的微生物杀虫剂资源具有重要的意义。 本论文通过微型平板法从2251株微生物中筛选出具有杀虫活性的菌株37株,阳性率为1.2%。论文主要对其中三株具有杀虫活性的细菌菌株100206,110104,110106进行了初步研究。 首先对分离到的110104菌株的杀虫活性、培养条件以及活性成分的性质进行了研究,发现菌株110104对常见的几种农业害虫均表现出一定的杀虫效果。在供试几种培养基中,黄豆粉培养基最有利于活性物质的产生。进一步对菌株的杀虫活性物质进行了分离鉴定,结果表明该活性物质是胞外分泌型,在中等极性溶剂中有较好的溶解性。乙酸乙酯浸提液经紫外全波长扫描发现,在221nm、227nm和268nm处具有吸收峰。 对分离到的110106菌株的杀虫活性及其培养特性进行了研究,发现该菌株培养72小时的发酵液对几种常见的农业害虫:棉铃虫、小菜蛾、菜青虫和二化螟均表现出较高的杀虫效果。同时运用PCR技术对菌株的杀虫基因型进行鉴定,发现菌株中含cry1型基因。通过酶切产生两条条带,一条分子量为1100bp左右,一条500bp左右,推测其可能为cry1Aa。在引物设计选择中只涉及到四种杀虫基因型的通用型引物,cry1、cry2、cry4和cry5,基因引物的选择面窄,更宽范围基因引物的选择及基因的分离鉴定还待进一步研究。 运用正交设计法对100206菌株的培养基组分进行了优化,得到最佳组合优化培养基:黄豆粉2.0%,淀粉2.9%,碳酸钙0.2%,葡萄糖0.5%,酵母膏0.2%,初始pH值7.5,海水75%,自来水25%。在28℃,180rpm的条件下发酵菌株100206,用培养72h后的发酵原液饲喂初孵棉铃虫幼虫48h后棉铃虫死亡率可达66.7%。为下一步产品的开发应用打下基础。


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