miR-181a—CARF靶向关系在胰腺癌中的研究

【摘要】：目的： 研究miR-181a在胰腺癌中的表达情况,验证miR-181a与CARF基因的靶向关系,并探讨其在该疾病中的功能,为阐明胰腺癌发病机制,寻求有效的治疗途径提供理论和实验依据。 材料和方法： 采用实时荧光定量PCR技术,检测并比较胰腺癌组织/细胞与正常胰腺组织/细胞中miR-181a的表达情况,通过转染miR-181a inhibitor下调PancⅠ胰腺癌细胞中miR-181a的浓度,分别用MTT试验评价肿瘤细胞增殖能力和FCM检测细胞凋亡状况。在生物信息学靶基因预测的基础上,构建携带CARF基因3'-UTR序列的PGL-3报告基因载体,利用双荧光素酶报告基因技术,验证miR-181a与CARF基因的靶向关系。同时,通过转染成熟hsa-miR-181a和miR-181a inhibitor分别上调和下调Panc细胞中miR-181a的浓度,观察CARF基因在转录及翻译水平的变化。用经上述处理的PaneⅠ细胞建立裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型,观察miR-181a浓度变化对PaneⅠ细胞体内成瘤能力的影响,并检测移植瘤中CARF基因在翻译及转录水平的表达情况。 结果： (1)相对于正常胰腺组织和器官,胰腺癌组织和细胞中miR-181a的表达水平明显升高(p0.05)。PancⅠ细胞转染miR-181a inhibitor后,PaneⅠ胰腺癌细胞中miR-181a的表达水平明显下调,MTT及FCM检测结果显示该组细胞相对于对照组细胞的增殖能力显著下降,细胞凋亡率明显上升。(2)基因测序结果表明,携带CARF基因3'-UTR序列的PGL-3报告基因载体构建成功,与成熟hsa-miR-181a共转于细胞后,荧光素酶活性较对照组明显下降,且与hsa-miR-181a浓度呈明显负相关；miR-181a浓度与CARF蛋白表达水平呈显著负相关,而与CARF mRNA水平无明显相关性。(3)经转染成熟hsa-miR-181a和niR-181a inhibitor的PaneⅠ细胞,所形成的皮下移植瘤的瘤体积、瘤重、抑瘤率无明显变化,CARF基因的蛋白和mRNA表达水平亦无明显变化。 结论： miR-181a在胰腺癌组织及细胞中表达明显上调,通过促进细胞增殖、抑制细胞凋亡发挥原癌基因样作用。CARF是miR-181a的靶基因,miR-181a通过下调该基因的表达促进胰腺癌的发展。如何稳定而有效地下调胰腺癌中miR-181a的表达水平,以达到生物治疗效果有待进一步探讨。