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神经胶质瘤细胞对于TGF-beta应答的蛋白组学分析

张维一  
【摘要】:转化生长因子(TGF-beta)在细胞的周期阻滞,分化,凋亡以及维护基因组稳定性方面的作用起着重要作用,是维持组织代谢平衡至关重要的因素。因此,可以说TGF-beta是一种强力的癌抑制因子,它能够抑制上皮细胞、内皮细胞和造血干细胞无控制的扩散。有趣的是,肿瘤的诱发过程中常常伴随某些降低细胞中TGF-beta蛋白活性以抑制TGF-beta通路的变化,这些变化使得肿瘤的恶化可以更进一步。此外,与TGF-beta相关的变化常常使得TGF-beta抑制肿瘤的角色转变为促进肿瘤细胞生长、侵袭和转移的角色。因此TGF-beta能够调控像神经胶质瘤等肿瘤的发生并且常常伴随着肿瘤的进展过程发生一些变化。广为所知的,TGF-beta肿瘤发展过程中存在明显的矛盾作用;TGF-beta在某些肿瘤发生早期往往表现为对于肿瘤发生的抑制,然而在之后的肿瘤发展中TGF-beta却表现出截然相反的作用。 在此,本研究着眼于TGF-beta1蛋白对于神经胶质瘤的所扮演的潜在角色,使用三标记SILAC这一新颖的定量蛋白质组方法研究神经胶质瘤细胞对于TGF-beta1蛋白的应答。在这一研究中,我们建立了一整套的三标记SILAC实验流程,并对其中的一些环节所用到的新颖方法进行测试验证。我们选取神经胶质瘤细胞系M059J为材料,提取细胞内和细胞外蛋白分别进行SILAC实验,使用质谱共鉴定到了2771个细胞内蛋白和471个细胞外蛋白。进一步的,以SILAC定量数据为参照,根据蛋白在TGF-beta1+/-处理的表达差异,找到了一些潜在的与TGF-beta应答相关的蛋白(255个细胞内蛋白和93个细胞外蛋白),并使用传统的方法对其中的19个蛋白的mRNA表达水平变化进行了验证。总的来说,我们的结果为TGF-beta通路在神经胶质瘤研究提供了一个可信的重要的蛋白表达谱数据。


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