收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

胸腺肽β4与体内血管再生的关系及促血管生成中的Notch通路机制的研究

吕淑敏  
【摘要】:实验背景: 随着经济社会的发展及人们饮食结构的改变,动脉粥样硬化导致的缺血性疾病也不断威胁着人们的健康,其引起的冠状动脉粥样硬化性心脏病以及外周血管疾病等导致的心肌梗死,下肢动脉闭塞等逐渐引起人们的重视。虽然介入治疗及外科手术的发展可以在一定程度上进行血运重改善部分病人的症状,但对于部分因血管病变较重或合并其他疾病等不适合手术治疗的患者而言,新的治疗方法的运用将会带来更多的临床获益。研究发现,缺血局部组织产生的侧枝循环会明显减轻机体缺血症状,改善预后。但其自身的生理过程缓慢,不能完全满足缺血组织的需要,因此人为的增加局部的促血管再生的因子的浓度则可以更大程度上的促进机体新生血管的形成,明显改善缺血症状,获得更多收益,也就是“治疗性血管再生”(therapeutic angiogenesis)。目前已有很多因子被认为可以应用于这项治疗中,包括血管内皮生长因子(VEGF),成纤维生长因子(FGF)等等。 目前对胸腺肽β4 (Thymosinβ4,Tβ4)的研究已发现其在血管再生中发挥了重要的作用,无论是体外还是在体试验均发现Tβ4可以促进内皮细胞的增殖,迁移及增强管腔形成能力,并且还可以通过促进内皮祖细胞的分化,归巢等过程促进新生血管形成,Tβ4低表达时则血管新生明显受到影响。目前已有的研究发现VEGF,PI3K,ERK等信号通路均有可能参与在Tβ4发挥作用过程中,但具体过程仍不能明确,并且目前对缺血机体自身产生的Tβ4随着缺血过程发展而发生的变化也尚无明确研究。 Notch信号通路是在进化中高度保守的信号通路,其在细胞的分化,增殖,迁移,血管形成,动静脉分化以及器官形成等各个过程均发挥了重要的作用,其在胚胎形成阶段的重要作用使得人们认为Notch与其他信号一起决定了细胞的最终命运。Notch表达的缺失将明显影响血管形成的过程,导致功能性血管形成减少,并影响血管功能,并且在此过程中Notch与VEGF通路相互作用并影响,共同参与血管再生过程。而在Tβ4促进血管再生的过程中是否有Notch通路参与其中及其在此过程中发挥的可能的作用目前尚无相关研究。 实验目的: 本实验主要研究缺血机体自身的Tβ4水平与体内血管再生的关系以及Notch通路在Tβ4促进HUVECs迁移及管腔形成中的作用。 实验方法: 体外实验中,以脐静脉内皮细胞(HUVECs)为研究对象,经不同浓度胸腺肽β4(Tβ4) (0,0.1,0.5, 1ug/ml)及不同时间(0,4H,8H,12H,24H)处理后,通过Western blot方法检测Cleaved-Notchl, Notch4表达量改变,再经DAPT抑制Notch活性后,予Tβ4处理HUVECs后,通过Western blot方法检测血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮钙粘连蛋白(VE-cadherin)表达,并通过Matrigel实验观察HUVECs在有或无DAPT抑制情况下,Tβ4促进管腔形成能力的改变;采用划痕实验判断Notch活性抑制前后Tβ4促进内皮细胞迁移能力的变化;通过将分离好的人淋巴细胞种于HUVECs上,经过transwell实验分析Notch通路抑制前后Tβ4对内皮细胞间连接的影响。设计合成siRNA分别干扰Notch1及Notch4表达,转染HUVECs后,再用Tβ4处理,通过matrigel检测管腔形成情况,transwell中穿过内皮细胞的淋巴细胞数目判断内皮细胞间连接的变化。在动物体内实验中,以C57 6-10周雄性小鼠为研究对象,结扎右侧下肢股动脉,建立下肢缺血模型,假手术组则单纯分离股动脉,正常小鼠,术后1天,1周,2周时分别通过心尖取血法收集血液并取下肢腓肠肌,经elisa方法检测小鼠血液中Tβ4表达量的变化,Western blot方法检测缺血不同时间后小鼠VEGF表达含量的变化,及免疫组化方法测定CD31表达改变,判断新生血管数量。临床试验中,选择275名于本院心内科住院并行冠脉造影的患者,根据冠脉造影结果及Rentrop评分分为造影正常组,侧支循环较差组和侧性循环较好组3组,所有患者于行冠脉造影前静脉抽血2ml,血清通过elisa方法检测Tβ4表达量的情况。 实验结果: 经不同浓度和不同时间的Tβ4作用后,HUVECs中的Cleaved-Notch1及Notch4表达量均增加,且在浓度为0.5ug/ml作用24小时最明显,经DAPT抑制Notch活性后,VEGF表达量较未抑制组明显减少,而经Tβ4作用后,不论用DAPT抑制与否VE-cadherin表达量均明显减少,matrigel验证管腔形成能力实验结果显示Tβ4可以刺激管腔形成,而经DAPT抑制Notch活性后Tβ4促管腔形成能力及内皮细胞迁移能力明显降低,也不再能增加跨HUVECs的淋巴细胞的数量。经Western blot测定siRNA转染后的HUVECs的Notch1及Notch4表达量,选定抑制率最高的siRNA序列,分别抑制Notch1及Notch4表达后,再将抑制后的细胞种于Matrige1上,均加入Tβ4作用12H后,显微镜下观察发现抑制Notch1及Notch4组管腔形成能力明显较阴性对照组减低,但较正常细胞管腔生长能力强,同样,转染抑制后的transwell实验也发现经Tβ4作用后跨过的淋巴细胞较未抑制组的明显减少,而分别转染抑制Notch1及Notch4的两组间无明显差别。小鼠体内实验中,经elisa检测血液中Tβ4含量发现,术后1天,小鼠体内Tβ4表达量开始升高并持续到1周时仍保持在较高水平,而2周时明显减低,但较正常小鼠比仍明显增高,术后1天及1周时VEGF表达量均增高,而2周时明显减低,但与正常小鼠相比仍明显升高,差异有统计学意义(p0.05),免疫组化分析CD31表达检测小血管生成发现,术后1天及1周时CD31表达明显增多,而术后2周则明显减少,但仍有表达。患者血清标本检测Tβ4提示侧枝循环较差组与较好组间含量有明显差别(分别为1024.50±516.92ng/ml,1373.00±1082.88 ng/ml),回归分析提示Tβ4与侧支评分间显著相关(p0.05)。 结论: 1.Tβ4作用于HUVECs时影响了Notch信号通路中Notch1及Notch4的表达,并使其表达量增加。 2. Notch1及Notch4参与了Tβ4促进HUVECs管腔形成的过程,阻断Notch活化则Tβ4作用减弱,但仍有部分作用。 3. Notch活性受到抑制时Tβ4促进HUVECs内皮细胞迁移的作用明显减低,VEGF及VE-cadherin表达明显减少。 4.缺血体内新生血管形成数量同VEGF及Tβ4表达正相关,Tβ4促进新生血管形成的下游机制可能与VEGF有关。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 叶静静,马道新,赵建强,纪春岩;四种Notch配体信号功能活性比较[J];山东医药;2004年07期
2 鲁茁壮,吴祖泽,刘红军,张群伟,贾向旭,王立生;人Delta-like-1胞外区在CHO细胞的表达纯化及对造血祖细胞的扩增作用[J];中国实验血液学杂志;2003年03期
3 王泽剑;Notch,Wnt信号通路及其与阿尔采末病的关系[J];国外医学.生理.病理科学与临床分册;2002年05期
4 贾向旭,鲁茁壮,王华,段海峰,张群伟,吴祖泽,王立生;激活Notch信号抑制多发性骨髓瘤细胞凋亡[J];中国实验血液学杂志;2004年03期
5 何飞,杨峥嵘,谭颖徽;Notch配体Delta1对人牙髓干细胞分化的影响[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2005年04期
6 鲁茁壮,吴祖泽,张群伟,王华,刘红军,贾向旭,王立生;重组人Delta-like-1胞外区促进细胞因子对脐带血造血祖细胞的扩增[J];军事医学科学院院刊;2004年02期
7 张家墅;甄海宁;章翔;;Notch信号通路与脑肿瘤研究现状[J];中华神经外科疾病研究杂志;2008年06期
8 俞海;钱关祥;葛盛芳;;Notch途径与宫颈癌细胞系的增殖调控[J];生命的化学;2006年04期
9 付剑亮;孙晓江;;Notch信号通路与神经系统疾病[J];国际神经病学神经外科学杂志;2007年03期
10 何飞,杨峥嵘,谭颖徽;Notch配体Delta-1对人牙髓干细胞体外增殖的影响[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2005年08期
11 张燕;郑志竑;;Notch的双重作用与肿瘤发生[J];中国肿瘤;2008年11期
12 黄红杰;;实体瘤中Notch信号途径的研究进展[J];健康研究;2009年02期
13 纪春岩,马道新,郭农建,赵建强,张茂宏;Delta4的功能性研究及与其他Notch配体的比较[J];山东大学学报(医学版);2003年05期
14 陈镇洲,徐如祥;神经胶质细胞命运与Notch信号途径的决定作用[J];中国临床康复;2005年17期
15 苗瑞新;;Notch信号转导系统与淋巴细胞发育的研究进展[J];国际移植与血液净化杂志;2006年06期
16 王迎;王建祥;;Notch与白血病[J];医学综述;2007年22期
17 钟加滕;刘菲;衣豪伟;孙琳;于慧美;杨冬艳;;人肾细胞癌Notch信号途径相关基因的表达及其意义[J];中国实验诊断学;2010年11期
18 杨慧;刘瑜;李汇华;;Notch信号通路与高血压的关系[J];中国动脉硬化杂志;2011年03期
19 李 钢;Notch信号传导通路对神经干细胞分化调控的作用[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;2002年03期
20 陆群,吴补领,王冀姝,韩骅,周学东;Notch信号分子于小鼠牙髓干细胞样细胞表达的研究[J];华西口腔医学杂志;2004年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 高嵩;刘鹏;;Notch信号通路的失活损害了成骨细胞矿化的进程[A];中华医学会第三次骨质疏松和骨矿盐疾病中青年学术会议论文汇编[C];2011年
2 郭萌;张华;边凤花;李舸;夏国良;;在小鼠原始卵巢形成过程中孕酮能够抑制Notch信号通路的表达[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
3 兰雨;;Endothelial Smad4 Maintains Cerebrovascular Integrity by Activating N-cadherin through Cooperation with Notch[A];第二届模式生物与人类健康研讨会会议论文集[C];2012年
4 史涛坪;;Association of Low Expression of Notch-1 and Jagged-1 in Human Papillary Bladder Cancer and Shorter Survival[A];第二届中国科学院博士后学术年会暨高新技术前沿与发展学术会议程序册[C];2010年
5 林春兰;郑海涛;王春燕;杨力建;陈少华;李萡;周羽竝;谭获;李扬秋;;T-ALL中Notch1基因突变和高表达特点[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
6 耿涛;杨福合;邢秀梅;李春义;;Notch信号通路在体外培养的鹿茸干细胞中的表达[A];2010中国鹿业进展[C];2010年
7 崇蕾;李昌崇;张维溪;聂颖;王婷;;Notch信号通路对哮喘小鼠急性气道炎症的影响及调节[A];2011年浙江省医学会儿科学分会学术年会暨儿内科疾病诊治新进展国家级学习班论文汇编[C];2011年
8 顾问;郭雪君;丁涛;;Notch信号通路胞外调控分子Fring对哮喘T细胞分化的影响[A];中华医学会呼吸病学年会——2011(第十二次全国呼吸病学学术会议)论文汇编[C];2011年
9 付璐;辛晓敏;李洁;吴悦;张云平;;Notch配体刺激对白血病细胞内Cleaved Notch1蛋白及基因表达的影响[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
10 邹晓英;庄姮;岳林;高学军;;阻断Notch信号通路对人牙髓细胞增殖和老化的影响[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吕淑敏;胸腺肽β4与体内血管再生的关系及促血管生成中的Notch通路机制的研究[D];浙江大学;2011年
2 张庆华;Notch信号对天然免疫的调控作用及其机制研究[D];第二军医大学;2011年
3 高方;Notch途径在中枢神经系统发育过程中的作用[D];第四军医大学;2010年
4 于恒超;Notch信号通路在肝脏缺血再灌注损伤中的作用及作用机制的研究[D];第四军医大学;2011年
5 何金婷;Notch通路在脑缺血损伤中的作用及信号转导机制研究[D];吉林大学;2012年
6 王琳;Notch信号通路调控肝再生的细胞生物学基础及其分子机制的研究[D];第四军医大学;2010年
7 丰帆;Notch信号缺失对小鼠树突状细胞抗肿瘤免疫功能的影响及其机制研究[D];第四军医大学;2010年
8 李瑾;Notch信号通路在常染色体显性多囊肾病发生中的作用及机制研究[D];第二军医大学;2011年
9 窦国睿;Notch信号通路在脉络膜新生血管发生发展中的作用[D];第四军医大学;2011年
10 尹郸丹;Notch信号通路对小鼠巨噬细胞功能调控的研究[D];第四军医大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张树君;Notch信号在小鼠胚胎早期造血的表达[D];重庆医科大学;2011年
2 潘庆;Notch信号通路在心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化中的作用[D];第四军医大学;2010年
3 于秀文;Notch信号通路在肺成纤维细胞表型转化中的作用及机制研究[D];南昌大学;2012年
4 王煜;Notch信号通路在人肾细胞癌组织中的表达及其意义[D];吉林大学;2010年
5 张赫;肌源性干细胞在修复大鼠脊髓损伤过程中Notch1基因的表达差异[D];辽宁医学院;2011年
6 孟晓;β-榄香烯对大鼠骨髓来源内皮祖细胞分化及分化过程中Notch信号通路的影响[D];中国医科大学;2010年
7 杨春秀;Notch基因过表达对K562细胞增殖影响及相关机制研究[D];重庆医科大学;2011年
8 赵晓莉;儿童急性白血病Notch1、Jagged1基因和蛋白表达及临床意义[D];第四军医大学;2012年
9 郭亚;Notch1基因对人胶质瘤U251细胞增殖和周期的影响及其机制的初步研究[D];福建医科大学;2010年
10 钱春发;胶质瘤U251细胞中Notch1-DLL1反馈环路的初步研究[D];南京医科大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;为什么心在左肝在右?[N];新华每日电讯;2004年
2 殷赅 游心;奥巴马先下两镇 美选民投票热情空前[N];第一财经日报;2008年
3 辛华;血管再生法有望治疗心肌梗塞[N];医药经济报;2003年
4 曹丽君;有效抑制器官移植排异反应[N];医药导报(中药报);2003年
5 曹丽君;英国 尝试抑制器官移植排异反应新方法[N];医药经济报;2003年
6 何德功;日本用血管再生法治疗闭合性动脉硬化[N];中国中医药报;2003年
7 奥闻;可使心肌内血管再生[N];医药经济报;2002年
8 张道生;细胞移植促进肺部毛细血管再生[N];中国医药报;2005年
9 四川省人民医院药剂科 杨勇;注射胸腺肽防感冒不可取[N];健康报;2009年
10 记者 董映璧;俄研制出血管再生基因工程结构[N];科技日报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978