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β-榄香烯联合热化疗对人肺腺癌A549细胞杀伤的实验研究

姜志明  
【摘要】:研究背景:肺癌是严重危害人民生命和健康常见的一种恶性肿瘤,其中非小细胞肺癌是预后最差的恶性肿瘤之一,其化疗效果很不理想,一个重要原因是多药耐药的存在。热疗现已应用在肺癌治疗中,常用来和化疗联合治疗肿瘤。β-榄香烯是一种新的二类抗癌药物,在临床上与化疗联合应用显示较好的治疗效果。临床实践上有人将β-榄香烯联合热化疗治疗晚期肺癌病人,取得一定的效果。但是β-榄香烯相关基础研究的支持不够,对其应用造成某种程度的限制。 实验目的:研究不同浓度β-榄香烯在37℃或42℃下联合顺铂对A549细胞的抑制能力,获得对临床有指导意义的药物浓度,并用试图探讨可能的作用机制。 方法:使用不同浓度顺铂和β-榄香烯在37℃或42℃处理A549细胞,MTT法检测细胞抑制率;15μg/ml或60μg/mlβ-榄香烯与4μg/ml(?)(?)铂联合,于37℃或42℃处理处理A549细胞,MTT法检测细胞抑制率;15μg/ml和60μg/mlβ-榄香烯分别联合热疗和4μg/ml顺铂处理细胞后,流式细胞术检测细胞周期,电镜观察凋亡现象,RT-PCR和Western Blot法检测各组细胞内热休克70基因(HSP70)的转录和表达,检测各组细胞耐药相关基因MDR1和Bcl-2/Bax的转录。 结果:37℃和42℃下顺铂及榄香烯的细胞抑制率未见显著性差异;4μg/ml顺铂和15μg/mL榄香烯联合,42℃的抑制率高于37℃下的抑制率并有显著性差异,而4μg/ml顺铂和60μg/ml榄香烯联合,42℃的抑制率低于37℃的抑制率并有显著性差异;各组HSP70基因:mRNA转录水平未见显著性差异,HSP70蛋白表达除了37℃下顺铂4μg/ml组、榄香烯60μg/ml、顺铂4μg/ml联合60μg/ml榄香烯组外其余各组均显著升高(p0.05);37℃下各组MDR1基因mRNA转录和蛋白表达多数降低,顺铂4μ/ml联合榄香烯15μg/ml组与37℃对照组相比显著降低(p0.05),42℃下顺铂4μg/ml联合15μg/ml榄香烯组的水平与37℃对照组有显著性差异(p0.05),但是蛋白表达未见显著性差异;各组Bcl-2基因mRNA水平多数降低,且与对照组比较有显著性差异(p0.05),Bax基因mRNA水平未见显著性差异。 结论:在37℃和42℃下,榄香烯联合顺铂显示不同的杀伤效果,低浓度15μg/ml榄香烯在联合42℃热疗和顺铂时,可能主要通过抑制Bcl-2基因的生物学活性,降低细胞对顺铂的耐药性,从而增加对细胞的抑制率。


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