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紫杉醇生物可降解胆肠支架预防胆肠吻合口狭窄的动物实验研究

梁霄  
【摘要】:第一部分 紫杉醇生物可降解胆肠支架的制作 研究目的使用可降解弹性体材料为涂层材料,设计制作一种紫杉醇生物可降解胆肠吻合支架。 研究方法由浙江大学高分子材料系提供可降解弹性体涂层材料,该材料采用单体L-丙交酯(L-LA)和ε-己内酯(ε-CL)为原料,开环聚合合成共聚物(生物可降解弹性体)。支架采用双涂层设计,将生物可降解弹性体与紫杉醇粉末溶于两者共同的溶剂四氢呋喃中,采用浸泡的方式将之涂于先前制备好的聚乳酸胆肠吻合支架上(内涂层),烘干至恒重。将该弹性体单独溶于四氢呋喃溶剂中,同样采用浸泡方式将之涂于上述支架上(外涂层),并烘干至恒重。 结果使用可降解弹性体涂层材料,采用双涂层设计,制作了紫杉醇生物可降解胆肠支架。 结论使用可降解弹性体涂层材料成功制作紫杉醇生物可降解胆肠支架。 第二部分 HPLC法测定紫杉醇生物可降解胆肠支架的体外释放率 研究目的建立测定紫杉醇生物可降解胆肠支架体外释放液中药物浓度的方法(HPLC(?)去),同时使用该法测定包裹不同层数空白外涂层的紫杉醇可降解胆肠支架的体外释放率。 研究方法根据包裹空白外涂层层数的不同,共制作12个胆肠支架,分为4组,分别为无空白涂层组,1层空白涂层组,2层空白涂层组及3层空白涂层组,每组3枚支架。将紫杉醇可降解支架置于3ml含0.1%(v/v)的Tween80溶液作为释放介质的PBS液中,隔日更换PBS液,持续20天。采用DCM提取,常温下吹干,残渣用移动相溶解,进样20ul。采用HPLC法测得其中紫杉醇含量。色谱条件为Dikma-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相:乙睛-水-甲醇(58:37:5),流速为1 mL/min,检测波长为230 nm,柱温为25℃。 结果本色谱条件在0.1-30μg/ml范围内线性关系良好,专属性强,精密度与回收率高;紫杉醇涂层生物可降解支架在体外可缓慢释放药物;紫衫醇涂层外侧包裹空白外涂层可延缓药物的释放时间,空白外涂层层数越多,药物起始释放时间越迟。其中包裹2层空白外涂层紫杉醇可降解支架在7-9天时药物开始有明显释放。 结论HPLC(?)去可简便、准确地测出紫杉醇涂层生物可降解支架体外释放率;支架释放药物的速率平稳、可控;包裹空白外涂层可延缓支架的药物起始释放时间。 第三部分 紫杉醇可降解胆肠支架对猪胆肠吻合口愈合过程的影响 研究目的通过动物实验观察紫杉醇生物可降解胆肠支架对猪胆肠吻合口愈合过程的影响,评价该支架对胆肠吻合术后吻合口狭窄的预防作用。 研究方法以巴马小型猪为实验对象,模拟临床常用手术方式,采用Roux-en-Y吻合,构建猪胆肠吻合模型。24只动物随机分为两组,紫杉醇生物可降解支架置入组为实验组,裸支架置入组为对照组,每组12例。分别于术后1月、3月及6月处死动物并取材,观察两组的吻合口愈合情况,比较其瘢痕纤维增生大体观、胆道造影情况及组织病理形态学改变,包括HE染色和Masson染色,采用免疫组化和定量PCR法测定吻合口α-SMA、TGF-β1和b-FGF的相对含量。 结果所有手术均顺利完成,两组动物均无术中死亡发生,术后恢复顺利,无死亡及明显胆瘘发生。紫杉醇支架组与裸支架组术后1月、3月、6月的ALT、AST、ALP及TBIL值与术前均无明显差异(P0.05)。胆道造影显示术后六月裸支架组有一头实验动物胆总管和肝内胆管轻度扩张。HE染色和Masson染色均显示术后各时段紫杉醇支架组纤维增生情况比裸支架组轻。免疫组化及定量PCR的结果显示术后1、3、6月紫杉醇支架组中α-SMA、TGF-β1的表达量低于裸支架组,b-FGF的表达量高于裸支架组(P0.05)。 结论紫杉醇生物可降解胆肠支架能在一定程度上抑制猪胆肠吻合口狭窄趋势。


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