收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

烟草突变体创制及其表型鉴定

严广号  
【摘要】:创制突变体是作物功能基因克隆和品种选育的重要途径。本研究针对烟草红花大金元和珊西两个品种为实验材料,通过农杆菌介导T-DNA插入和辐射诱变方法进行了烟草突变体创制和表型鉴定。获得如下主要结果: 1、转基因体系的优化:农杆菌介导用含有抗潮霉素的Hpt基因的二元载体pCMI8将干扰RNA表达基因M8导入烟草叶片外植体中,然后在含有潮霉素的筛选培养基上进行筛选培养。对获得的转基因植株进行PCR检测鉴定,借以初步探讨干扰RNA表达基因M8在植物中的转化和表达情况,结果表明,干扰RNA表达基因M8已整合到烟草的基因组中。在遗传转化过程中,对受体再生系统建立进行了研究,筛选出有利于受体材料的高效培养基配方,最终确定出有利于叶片愈伤诱导的培养基为:MS+6-BAlmg/L+ NAA0.1mg/L;有利于芽分化的培养基为:MS+NAA0.2mg/L.随后通过外植体材料生长状态、Hpt敏感性、预培养时间、农杆菌浓度、浸染时间、共培养时间等对转化的影响研究,建立和优化了转化体系。总体来讲,在附加3%蔗糖的MS培养基上生长的组培苗叶片为最佳外植体,在摇菌过程中,使用50mg/L Kan进行阳性菌株的筛选以及50mg/LRif进行抑菌比较适合,在愈伤组织诱导发生到转化苗出芽生根培养过程中,使用25mg/L Hpt进行阳性植株筛选以及250 mg/LCarb进行抑菌比较适合。25℃黑暗条件下预培养2天,抗性愈伤诱导效果最好;农杆菌浓度在OD600为0.4-0.6,侵染时间为8-10min时,抗性愈伤生长状态最好。 2、T-DNA插入突变体:获得转基因植株9株,表型较野生型有显著的变异。株型十分紧凑,节间变窄,茎秆粗壮变短。叶肉细胞增多,叶片变厚,颜色深绿,枝叶茂盛。在花期之前会分化长出2-3个顶芽,在没打顶的情况下会自然长出很多侧芽。 3、辐射诱变突变体:用剂量为400Gy60Coγ射线辐照处理烟草红花大金元种子,将处理后的种子种于大田,鉴定后代植株性状的变异。试验研究结果表明:M0代在种子出苗率、植株叶片性状(叶色、叶形、叶面及叶缘等变异)、茎秆性状(株高、株型及侧芽数目变异)、生育期以及花器官等均出现明显变异。本研究为烟草基因遗传分析、基因定位与克隆及其进一步基因功能分析奠定了基础,为烟草育种提供了重要的材料。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张向前;刘芳;朱海涛;李晓燕;曾瑞珍;;水稻Ds插入淡绿叶突变体的鉴定和遗传分析[J];遗传;2009年09期
2 郭飞;卢杰;魏斌;张自立;;拟南芥抗镧突变体的筛选及初步鉴定[J];安徽农学通报(上半月刊);2010年11期
3 魏然;阮颖;王莹;刘春林;;化学诱导激活系统的研究进展[J];作物研究;2006年05期
4 赵天祥;孔秀英;周荣华;高双成;贾继增;;EMS诱变六倍体小麦偃展4110的形态突变体鉴定与分析[J];中国农业科学;2009年03期
5 贺云霞;徐慧;叶飞;孙慧玲;王宏俊;龚玉梅;张莉;黄秀芬;张培君;;副猪嗜血杆菌EZ-Tn5转座子插入突变体库的构建及减毒株的筛选(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2011年02期
6 黄国庆,姚泉洪;高通量筛选蛋白质突变体库方法的研究进展[J];上海农业学报;2004年02期
7 陈亮;储黄伟;袁政;潘爱虎;梁婉琪;黄海;沈明山;张大兵;陈亮;;~(60)Co-γRay射线诱变水稻突变体的分离和遗传学初步分析[J];厦门大学学报(自然科学版);2006年S1期
8 杨松涛;张涛;郑家奎;;水稻突变体库研究进展[J];中国农学通报;2010年19期
9 宛淑艳;张治国;赵桂兰;;基因激活标签体系及其在植物功能基因组学研究中的应用[J];中国农学通报;2008年04期
10 张晓勤;薛大伟;周伟辉;邬飞波;张国平;;用甲基磺酸乙酯(EMS)诱变的大麦浙农大3号突变体的筛选和鉴定[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);2011年02期
11 韩锁义;杨玛丽;陈远东;于静静;赵团结;盖钧镒;喻德跃;;大豆“南农94-16”突变体库的构建及部分性状分析[J];核农学报;2008年02期
12 陈远东;喻德跃;;EMS诱发大豆“南农94-16”突变体库的扩建及部分突变体的SSR分析[J];大豆科学;2009年04期
13 孙万刚;;拟南芥突变体构建方法及目的基因分离鉴定技术[J];安徽农业科学;2010年18期
14 李伟;智慧;王永芳;李海权;刁现民;;谷子EMS诱变的处理条件分析[J];河北农业科学;2010年11期
15 贺云霞;徐慧;叶飞;孙慧玲;王宏俊;龚玉梅;张莉;黄秀芬;张培君;;副猪嗜血杆菌EZ-Tn5转座子插入突变体库的构建及减毒株的筛选[J];安徽农业科学;2011年13期
16 李琳琳;王凤茹;韩建民;董金皋;;拟南芥干旱敏感突变体的筛选及其对干旱胁迫的响应[J];河北农业大学学报;2011年04期
17 烟草突变体库创制、筛选与分析项目组;李凤霞;晁江涛;徐建华;;烟草突变体库创制、筛选与分析项目中期检查会议在青岛召开[J];中国烟草科学;2011年04期
18 刘辉;赵竹青;陈涛;;水稻T-DNA插入突变体库筛选及其突变特征研究[J];江苏农业科学;2007年01期
19 王凤华;李光远;;T-DNA插入突变及其研究进展[J];河南农业科学;2007年06期
20 申佩弘;晁红军;宋修鹏;武波;唐咸来;;利用双标记mTn5构建甲基杆菌MB200突变体库的研究[J];山西农业科学;2008年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 贾娇;邢继红;董金皋;;拟南芥抗核盘菌突变体的筛选[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
2 姚姿婷;蓝秀万;周燕;周辉;商巾杰;陈保善;;大规模板栗疫病菌突变体库的构建[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
3 胡瑞学;刘金亮;张世宏;赵文生;彭友良;潘洪玉;;尖孢镰刀菌蓖麻专化型突变体库的构建及其部分突变子的筛选[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
4 周鹏;潘丽;刘丽萍;王子月;黄俊斌;;希金斯刺盘孢T-DNA插入突变体库的构建与筛选[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
5 佟星;吴宝美;赵波;叶剑;刘红霞;曾潮武;濮绍京;万平;;小豆突变体库构建及突变体筛选[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
6 肖雪琼;谢甲涛;付艳苹;程家森;姜道宏;李国庆;易先宏;;核盘菌致病缺陷型突变体筛选及其分子致病机理初步研究[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
7 佟向军;夏梽丹;祖尧;Helena Telfer;胡婧;于静怡;刘欢;张泉;苏都莫日根;林硕;张博;;通过以斑马鱼为模式的遗传筛选研究脊椎动物细胞分化与发育[A];2010·第一届斑马鱼学术研讨会论文摘要集[C];2010年
8 ;植物分子遗传国家重点实验室[A];培育生物产业,发展绿色经济——第五届中国生物产业大会·2011基因科学与产业发展论坛会刊[C];2011年
9 杨哲;郭慧;邢来君;李明春;;根癌农杆菌介导法选育甘油氧化酶高产菌株的初步研究[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
10 易建华;吕芬;杨焕文;;烟草中烟碱形成及影响因素[A];云南省作物学会2000—2003年优秀论文选集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 邵勤;一个新的甜瓜叶色黄化突变体研究[D];东北农业大学;2013年
2 李宁;小麦黄绿突变体特性研究与遗传分析[D];中国农业科学院;2012年
3 吴宇;拟南芥耐低硫突变体高通量筛选的建立和鉴定[D];中国科学技术大学;2010年
4 韩锁义;大豆突变体库的构建及子叶折叠突变相关基因的初步研究[D];南京农业大学;2008年
5 侯蕾;拟南芥盐敏感突变体的筛选鉴定及蛋白酶体β5亚基与植物抗氧化性的相关性研究[D];山东师范大学;2012年
6 徐荣旗;棉花黄萎病菌T-DNA插入突变体表型特征及侧翼序列分析[D];中国农业科学院;2009年
7 周小静;拟南芥RETARDED ROOT GROWTH基因的图位克隆及功能分析[D];华中农业大学;2011年
8 王伟平;水稻包穗突变体M893的形态、生理及遗传特性研究[D];湖南农业大学;2010年
9 刘文真;三个水稻叶色突变体的鉴定与基因克隆[D];浙江大学;2006年
10 邹良平;水稻卷叶突变体的细胞形成机制以及OUL1基因的克隆和功能研究[D];中国农业科学院;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王振宇;拟南芥光周期敏感型多效突变体ldd1的表型及遗传分析[D];兰州大学;2010年
2 马振;水稻Tos17突变体库的创建和应用[D];华中农业大学;2010年
3 李雪华;大豆突变体库的初步构建及突变类型的鉴定[D];南京农业大学;2003年
4 吕明;芥菜型油菜黄化突变体L638-y叶片缺绿的生化机制探讨[D];西北农林科技大学;2010年
5 李瑞清;水稻白化转绿突变体G_9的特性分析和基因定位研究[D];安徽农业大学;2010年
6 唐京生;农杆菌介导水稻转化系统的优化及水稻T-DNA插入突变体库的初步建立[D];四川大学;2002年
7 沈年伟;水稻半卷叶突变体的遗传分析与基因定位[D];中国农业科学院;2011年
8 胡时开;一个水稻矮化迟抽穗突变体(lhdd)的遗传分析与基因的精细定位[D];中国农业科学院;2010年
9 闫双勇;水稻T-DNA插入突变体库的构建与初步分析[D];四川农业大学;2004年
10 柴振光;盐芥激活标签突变体库的构建及盐芥转座子标签突变体的筛选[D];山东师范大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 王丹;我国建成大型小鼠基因突变体库[N];健康报;2010年
2 付毅飞;给基因装上“开关”[N];科技日报;2004年
3 本报记者 齐冰;2003,生物科技成果多[N];健康时报;2003年
4 本报记者 李鹏;李传友:当植物面临逆境[N];北京科技报;2010年
5 廖要明 魏淑秋;气象条件与烟草生产[N];中国气象报;2003年
6 周涛;设“陷阱”取证有悖法治原则[N];中国质量报;2003年
7 ;烟草品牌的N种活法[N];中国质量报;2004年
8 欧阳梦云;香烟该不该标明保质期[N];经济日报;2003年
9 翟紫旺;香烟为何不标保质期?[N];市场报;2003年
10 高志明;几种植物源农药的使用[N];云南科技报;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978