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蛋鸽就巢内分泌机制及其营养调控研究

张敏  
【摘要】:以美国王鸽为试验对象,研究不同生理阶段蛋鸽生殖激素变化及就巢相关基因表达特性,以探讨不同时期生理变化规律和就巢的内分泌机制。在此基础上,研究功能性氨基酸对蛋鸽生产性能的影响,以探讨通过营养调控手段缓解蛋鸽就巢习性、缩短产蛋间隔的效果及机理。主要研究结果如下: 1.蛋鸽血清生化指标和输卵管形态结构差异 (1)产蛋期、就巢期与产蛋期相比,就巢期蛋鸽雌激素水平下降41.29%(P0.05),催乳素(PRL)水平上升110.28%(P0.05)。产蛋后蛋鸽血清PRL水平呈现先升高后下降的趋势,雌激素变化趋势相反。输卵管切片观察结果显示产蛋期输卵管腔较就巢期狭窄,管壁褶皱排列较紧密,褶皱上绒毛密集,腺体组织较明显。 (2)不同阶段青年鸽(150±10日龄)、初产(180±10日龄)、产蛋2次(210±10日龄)、产蛋5次(270±10日龄)、停产(5-6岁)蛋鸽血清指标显示:PRL、FSH水平随产蛋次数增加升高,停产时最高(P0.05);血清白蛋白水平随产蛋次数增加显著下降,停产时达到最低(P0.05)。停产时血清孕激素水平显著升高(P0.05),血清钙水平急剧下降(P0.05)。光镜观察输卵管形态显示:停产蛋鸽输卵管管腔变大,褶皱排列较为疏松且不规则,呈现萎缩迹象。提示高水平的PRL是维持就巢的关键因素,PRL、FSH、孕激素水平升高与钙流失可能是卵巢衰老的原因之一。 2.就巢相关基因克隆及分析 通过比较相近鸟类保守序列设计简并引物,采用巢式PCR成功克隆得到鸽VIP、PRL和FSH片段长度分别为322bp、658bp和354bp。将核苷酸序列登录到Genbank,获得登录号分别为FJ913875、GU968532和FJ913876。推断的氨基酸片断相似性比对结果显示:美国王鸽VIP与北京鸭DQ023227.1、鸡CAA56867、鹅AAY59005、爪哇禾雀BAF96737、火鸡P45644、白喉雀ADK26700、斑胸草雀XP002187804大部分氨基酸序列高度相似,同源性较高,一致性分别为95.9%、95.3%、95.5%、95.3%、95.3%、97.2%和95.3%;美国王鸽PRL基因与火鸡AAB60604.1、鹦鹉BAF81527.1、鸡NP_990797、瘤鸭CAJ55836、鸭BAD14942.1、家鹅AAY59658、珠鸡BAG68294.1、蓝孔雀BAG68293、爪哇禾雀BAF96736.1、鸵鸟BAF81528.1、鹌鹑BAD10927、环颈雉BAG68292.1氨基酸序列一致性分别为90.4%、93.2%、91.3%、94.5%、95.0%、92.7%、92.2%、89.0%、91.3%、91.8%、和88.6%,与鸭、鹅同源性较高;FSH基因与日本鹌鹑BAC01164、鸭ABB60052.1、朱鹮BAC07314、鹅ABX39193、鸡NP 989588、斑胸草雀XP 002194767和鸵鸟P80663基因一致性分别为94.1%、97.5%、99.2%、94.3%、94.9%、93.2%和92.5%,与朱鹮同源性最高。 3. VIP. FSH. PRL和PRLR mRNA基因的表达特点 采用荧光定量PCR方法检测VIP、FSH、PRL和PRLR mRNA基因在蛋鸽不同时期、不同组织的表达量。(1)不同组织mRNA表达量结果显示:VIP表达量由多到少的顺序为脑、输卵管、脾脏、卵巢、肝脏、肌肉;FSH表达量顺序为卵巢、输卵管、脾脏、脑、肝脏、肌肉;PRLR表达量顺序为输卵管、卵巢、脑、肝脏、脾脏、肌肉;PRL表达量顺序为垂体、脾脏、输卵管、肝脏、心脏、卵巢、胰腺、肾脏。结果表明,VIP、PRL、FSH和PRLR基因在脑、垂体和性腺均有较高表达量。(2)产蛋期、就巢期mRNA表达量结果显示:就巢期卵巢PRL表达量显著高于产蛋期(P0.05)。(3)不同产蛋次数就巢相关基因mRNA表达量结果显示:垂体VIP在停产和初产期相对表达量较高(P0.05)。卵巢PRLR基因随产蛋次数增加显著下降,到停产时最低(P0.05))。卵巢FSH、垂体PRL基因表达量随产蛋次数增加而增加,到停产时最高(P0.05)。推测就巢期PRL水平升高与卵巢PRL基因mRNA表达量增加有关,蛋鸽卵巢功能退化与VIP、PRL基因mRNA表达量增多和PRLR基因mRNA表达量减少有关。 4.Y-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(Glu)对蛋鸽生产性能的影响 选取360日龄美国王鸽120对,随机分为5组,每组3个重复,每重复8对,分别在日粮中添加0(对照组)、20(试验Ⅰ组)、40(试验Ⅱ组)、80mg/kg GABA(试验Ⅲ组)和40 mg/kg Glu(试验Ⅳ组),研究日粮中添加γ-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(Glu)对蛋鸽产蛋性能的影响,并探讨其作用机理。结果显示:与对照组相比,80mg/kg GABA显著提高产蛋间隔期蛋鸽血清PRL水平,缩短产蛋间隔(P0.05);降低产蛋期血清胆固醇水平(P0.05)。40mg/kg Glu显著提高产蛋期、产蛋间隔期蛋鸽血清PRL水平及产蛋期FSH水平;显著提高产蛋间隔期PRL、FSH、VIP基因mRNA表达量(P0.05),降低PRLR基因mRNA表达量(P0.05)。提示GABA可能通过调节PRL水平及血清中营养成分的途径缩短产蛋间隔。Glu具有促进激素分泌的作用,但具有加速卵巢衰老的风险。


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