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对虾吞噬调控相关的miR-1功能以及siRNA结合蛋白的研究

王佳佳  
【摘要】:miRNAs是一类长度约20-24nt内源的非编码的单链小RNAs,从病毒到高等动植物普遍存在,通过转录后水平调控基因的表达,在生物系统发育、细胞分化、物质代谢、肿瘤发生等多种生命过程中发挥着不可或缺的作用。为了探究吞噬相关的miRNAs,本研究设计专一性抑制微丝聚合的细胞松弛素B处理对虾,影响细胞的吞噬活性,在此基础上进行高通量(?)niRNAs测序。比较对照组和试验组的miRNAs差异序列,筛选到21条可能参与吞噬调控的miRNAs,为rniRNAs调控吞噬的机制研究提供基础数据,有助于我们更深入的了解对虾的吞噬机理。基于吞噬调控相关的miRNAs高通量测序数据,选取进化上具有高度保守性、表达量也相对较高的miR-1,在对虾和小鼠细胞Raw264.7中对其调控吞噬的机制进行深入的试验探究。研究发现,(?)miR-1通过调控网格蛋白的表达影响细胞的吞噬过程,我们的研究结果增加了对(?)niRNA吞噬调控机制和途径的认识。随着对miR-1调控机制的研究深入,我们将在整个生物系统、网络层面综合理解miR-1的功能。 RNAi是由双链RNA(dsRNA)引发的一种特异性基因沉默现象,尤其在无脊椎动物中,RNAi是一种重要的抗病毒机制,并有研究表明RNAi在对虾体内具有抗病毒效果。dsRNA经Dicer裂解产生21bp的双链siRNA, siRNA作为核心指导者和ago蛋白以及一些辅助蛋白通过一系列复杂的过程参与RISC (RNA induced silencing complex)的形成。RISC装配是一个复杂精细的过程,参与其中的蛋白除了ago之外,还有dsRNA结合蛋白等辅助蛋白参与完成,然而这些研究尚不清楚。vp28-siRNA是21bp的双链siRNA,靶向对虾白斑综合症病毒的膜蛋白编码基因vp28。本研究在海洋生物对虾中利用生物素链霉素亲和系统筛选到vp28-siRNA互作蛋白精氨酸激酶,经western blot和RNA免疫共沉淀表明siRNA确与精氨酸激酶存在互作。该部分试验探究为进一步阐明无脊椎动物中siRNA介导的RNAi的作用机制,同时为RNAi抗病毒的研究提供参考。


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