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五种柑橘真菌性病害病原鉴定

朱丽  
【摘要】:本论文于2009年至2011年期间进行,针对全国多处柑橘产区的专家和农户反映的柑橘生长期病害展开研究。这些病因不明确的病害,正严重威胁着我国的柑橘产业。本研究在田间调查和研究的基础上,开展了果园跟踪观察,分离培养,致病性试验,病原菌的形态学和培养性状观察,并结合分子生物学技术,对五种柑橘真菌性病害的病原菌进行了鉴定,研究了部分病原菌的生物学特性和离体条件下的有效药剂。病原性质的确定为病害的有效控制奠定基础。现将本研究的结果总结如下。 1.柑橘轮斑病病原茵研究:自2006年或更早,陕西城固温州蜜柑(Citrus unshiu Marcov.)及金橘(Fortunella margarita (Lour.) Swingle)上发生一种国内外尚未报道过的毁灭性病害——轮斑病,已引起巨大经济损失。该病害只在晚冬和早春的时候流行。通过普通组织分离和毛细管单孢分离法,从受害叶片、嫩梢和枝干上分离得到拟隐壳孢属的一种真菌。通过在温州蜜柑的叶片上接种该菌的分生孢子悬浮液,完成科赫氏法则。基于LSU构建系统进化树,显示该病原菌属于拟隐壳孢属(有性型:明孢盘菌属,皮生科);分别基于ITS、SSU、TUB构建系统进化树,显示分离得到的病原菌菌株单独聚成一个分枝。通过形态学的进一步鉴定,病原菌与拟隐壳孢属已报道的真菌都不尽一致,推测其可能为拟隐壳孢属的一个新种。我们将其命名为Cryptosporiopsis citricarpa sp. nov。C. citricarpa在以蔗糖、果糖、麦芽糖、葡萄糖和山梨醇为唯一碳源时,生长态势较好,在乙醇上最差;不能利用尿素,0.2%wt/vol浓度的尿素甚至具有杀死病菌的能力。C. citricarpa在pH为4.0-5.0时生长态势最好。通过室内药剂初步筛选,苯醚甲环唑和咪鲜胺对C. citricarpa菌丝生长和孢子萌发有较好的抑制作用。 2.柑橘花瓣灰霉病引起的果面伤研究:本实验通过终花期挂牌跟踪、喷药防治花瓣灰霉病、幼果接种,研究柑橘花瓣灰霉病与果面疤痕的相关性,并观察所形成.的疤痕特征,同时明确其灰霉种类。挂牌跟踪试验结果表明,柑橘花瓣可受灰霉菌的感染,发生腐烂,腐烂的花瓣不易脱落,易黏贴在幼果上,花瓣上滋生的灰霉菌可感染幼果表皮,形成凹陷斑点或斑块,凹陷部位随后木栓化,呈痘疮状或脊状的凸起,凸起组织表面呈灰白色或灰褐色,随着果实的膨大,凸起部位逐渐变平坦,甚至稍许下陷,表面粗糙(似软木塞状,corky scars),大小形状各异的疤痕。接种试验表明,灰霉菌可以引起幼果表面产生黑色凹陷的斑点或斑块。花期喷施速克灵可以部分降低疤痕果的比例。综合以上结果,可以肯定花瓣灰霉腐烂与果实表面疤痕有关。通过形态学和分子鉴定,证明花瓣上的灰霉菌主要为灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea Pers. Ex. Fr.)。 3.金橘脚腐病病原菌鉴定:金橘是广西省壮族自治区桂林市的重要经济作物,但金橘脚腐病已成为当地严重的病害。发病植株树势逐渐衰弱,病斑若围绕树干一周,植株便枯死。本实验通过组织分离法从发病树干上不断分离得到一种真菌,并通过形态学特征初步鉴定为柑橘褐腐疫霉(Phytophthora citrophthora)。选择代表性菌株在金橘幼苗、嫩梢和枝干上进行接种,完成致病性测定。通过扩增转录间隔区序列(ITS)和翻译延长因子(TEF-1α),进一步确定引起金橘脚腐病的病原为柑橘褐腐疫霉。 4.金橘枝干开裂病原菌鉴定:2008年至2011年,广西省壮族自治区桂林市阳朔县金橘果园内大面积发生枝干开裂现象,且木质部变褐,严重影响当地主产业——古板金橘(Fortunella margarita (Lour.) Swingle) cv. Guban)的产量和品质。本实验通过连续3年田间观察、调查、采样和分离,并进行室内和田间致病性测定,证明以08YSJG-1和GLB1为代表的两类镰刀菌为金橘枝干开裂病的致病菌。通过形态学鉴定以及TEF1基因序列测定,进一步确定金橘枝干开裂主要由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和滕仓赤霉(Gibberella fujikuroi)复合种的一个新种(暂命名F. sp. GLB1)两种镰刀菌侵染引起。 5.胡柚脂斑病的病原菌鉴定及病害循环初步研究:胡柚(Citrus paradisi Mac. cv. Changshanhuyou)是浙江衢州、常山等地区重要的特色经济作物,但脂点黄斑病是胡柚生产过程中最主要的病害,引起冬季和早春大量落叶,轻者影响树势,重者可致全株枯死,甚至死树毁园。本研究从各种症状类型的发病叶片和果实上分离病菌,通过观察培养性状和形态学特征、分析分子序列(ITS),证明胡柚脂点黄斑病菌的病原为柑橘球腔菌(Mycosphaerella citri Whiteside)。病菌为害果实,产生不规则的黄斑。褐色小圆星型病斑上所得的病菌与脂点黄斑病斑上的一致,褐色小圆星型病斑上产生的分生孢子具有侵染性,能够诱导褐色小圆星型和脂点黄斑型症状,从而推测病菌可在树冠叶片上周年生长并产生分生孢子,进行传播和侵染。


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