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水稻纹枯病菌致病性鉴定与原生质体制备及水稻抗病性鉴定

阙亚伟  
【摘要】:水稻纹枯病是水稻上最重要的病害之一,病原菌为立枯丝核菌Rhizoctonia solani Kuhn。目前对其致病机理及分子生物学水平上的研究报道甚少。通过对水稻纹枯病菌进行遗传转化,构建病菌突变体库,对探讨致病机制、克隆致病相关基因有重要意义。病原菌原生质体的制备和再生是进行遗传转化的前提和关键。 本研究选用来源于广东省水稻纹枯病菌的强致病力菌株GD-118,对其原生质体制备和再生条件进行了探索,并参照稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)原生质体遗传转化体系对立枯丝核菌进行了遗传转化。此外,对来自浙江省的共224份水稻品种和江西省的100份水稻纹枯病菌菌株进行了抗病性及致病性鉴定,研究结果如下: 1.不同菌株致病性差异 利用水稻标准品种Jasmine85(抗)、91SP(抗)、C418(抗)、Lemont(感)和武育粳(感)对100份纹枯病菌进行致病力测定。经统计分析,表明不同菌株的致病力具有一定差异:Y-144、Y-12、Y-22、Y-116等表现为相对较强的致病力;Y-70、Y-17、Y-81、Y18等的致病力相对较弱。 2.不同水稻品种抗病性差异 利用致病力不同的纹枯病菌标准菌株C30(强)、GD-118(强)、E67(中)、YN-7(中)和YN-3(弱)对来自浙江省水稻品种224份进行田间试验和统计分析,发现Z7334、G07-76、浙农68、甬灿707、嘉早7308、温718等抗性较强。 3.水稻纹枯病菌原生质体制备条件优化 本文对不同胞壁降解酶及其组合进行了试验,明确15mg/mLGlucanex和10mg/mLLywallzyme的混合酶处理菌丝6h,可高效降解水稻纹枯病菌细胞壁并获得大量原生质体,原生质体产量达3-3.5×107个/g菌丝(即6-7×106个/mL),且对不同致病力的水稻纹枯病菌株E67、C30、YN-7和YN-3均有较好的降解作用。 4.水稻纹枯病菌原生质体转化 参照稻瘟菌原生质体转化方法,用质粒PCB1003、pTHPR1转化水稻纹枯病菌原生质体,20μg/mL的潮霉素作为转化的选择筛选浓度,能够获得转化子,但潮霉素抗性不能稳定遗传。


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